【摘要】 目的：建立吴茱萸中总酚酸含量的测定方法，测定吴茱萸及其炮制品中总酚酸的含量。方法：以绿原酸为对照品，用分光光度法在760nm处测定吸光度。体系中加入0.3%十二烷基磺酸钠溶液2mL，1%铁氰化钾-1%三氯化铁(1∶1)混合液2mL，用0.1mol/L盐酸溶液定容。结果：测定的两批吴茱萸药材中总酚酸的含量分别为29.89%和30.44%，经t检验差异没有统计学意义(P&>0.05)。吴茱萸炮制品中以醋制吴茱萸总酚酸含量最高，其次为甘草制吴茱萸，其余炮制品中总酚酸的含量都明显低于生药中的含量，经t检验，差异均有统计学意义(P&<0.01)。结论：吴茱萸经不同方法炮制后总酚酸的含量不同。所用检测方法简便、准确、快速，可作为吴茱萸中总酚酸含量的测定方法。
【关键词】 吴茱萸;总酚酸;炮制品
【ABSTRACT】 Objective:To establish a method for determining the contents of total phenolic acid in Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth and its processed product.Methods:Total phenolic acid was determined by the method of spectrophotometry at 760nm with chlorogenic acid as reference material.In the systematic solution，0.3% dodecyl sulfonic acisodium salt 2mL，and mixed solution with 1% K3[Fe(CN)6]1% were added.And also FeCl3(1∶1)2mL.with 0.1mol/L hydrochloric acid was added to the solution diluted to scale.Results:The contents of total phenolic acid were 29.89% and 30.44%.in the two kinds of Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth，there was no notable difference by t test(P&>0.05).The contents of total phenolic acid was the highest in its processed product by vinegar， the second was liquorice， the others were notable lower than Evodia ru
taecarpa(Juss.)Benth，there was notable difference by t test(P&<0.01).Conclusion:The contents of total phenolic acid were different in its different processed product.The method was simple，accurate and rapid.It was a better method to determine the contents of total phenolic acid in Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth.
【KEY WORDS】 Evodia rutaecarpa(Juss.)Benth，Total phenolic acid，Processed drugs
吴茱萸[Evodiaru taecarpa(Juss.)Benth.]又名淡茱萸、吴萸，是芸香科植物吴茱萸接近成熟的果实。吴茱萸性味辛、苦、温，入肝、肾、脾、胃经。有温中散寒、疏肝理气、降逆止呕、燥湿定痛、抑菌、驱蛔、抗血栓形成、利尿、抗肿瘤、抗缺氧、镇痛、升高体温等作用。吴茱萸气味芳香，有小毒，临床上多炮制后入药。
吴茱萸中含有多种有效成分，但有关吴茱萸中总酚酸方面的研究报道少见。据文献报道[13]，总酚酸具有抗血栓形成、溶纤和抗脂质过氧化的作用，是治疗心肌缺血、心绞痛、心肌梗死等心血管疾病的有效成分。我们以铁氰化钾三氯化铁混合液为显色剂[4]，绿原酸为对照品，用分光光度法测定吴茱萸及其炮制品中总酚酸的含量，为全面了解吴茱萸提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
752紫外可见分光光度计
绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所提供，编号：110753200413)
乙醇、铁氰化钾、三氯化铁、盐酸、十二烷基硫酸钠均为分析纯试剂。
1.2 实验方法
1.2.1 对照品溶液的制备 精确称取绿原酸对照品2.41mg，用95%乙醇溶解，定容为10.00mL，得0.241mg/mL绿原酸对照品溶液。
1.2.2 供示品溶液制备 精密称取吴茱萸生药和各种炮制品约0.1g，均精密称定，用50mL蒸馏水浸泡4h，沸水浴提取三次，提取时间分别为40min，20min，20min，提取液合并(包括残渣)，置于100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液，取20mL续滤液备用。
1.2.3 吴茱萸炮制品制备
(1)醋炙吴茱萸:吴茱萸按10∶3(g∶g)加米醋浸透，文火炒干。
(2)盐炙吴茱萸：吴茱萸按10∶2(g∶g)加盐水(浓度为15%)喷匀，闷润至柔软，微火炒干。
(3)甘草炙吴茱萸：吴茱萸按10∶1.5(g∶g)称取甘草片，浸泡20min，第一煎加8倍量水，煮沸后保持30min;第二煎加5倍量水，煮沸后保持25min。二煎滤液合并，浓缩，趁热拌入吴茱萸，闷润，翻拌，至汁液全部吸尽，个身膨起，文火炒干。
(4)汤洗7遍：用热水洗7遍，自然晾干。
(5)汤洗7遍后干燥：用热水洗7遍后文火炒干。
(6)酒炙吴茱萸：净吴茱萸按10∶2(g∶g)加黄酒浸透，文火炒干。
(7)姜炙吴茱萸：净吴茱萸按10∶1(g∶g)称取鲜姜，捣烂，加少许水，取汁，拌入吴茱萸浸透，微火炒干。
1.2.4 总酚酸测定方法
精密吸取供试品溶液适量，置于25mL容量瓶中，加无水乙醇至5mL，加入0.3%十二烷基磺酸钠溶液2mL，1%铁氰化钾-1%三氯化铁(1∶1)混合液2mL，摇匀，暗处放置5min，加0.1mol/L盐酸溶液至25mL，摇匀，暗处放置20min，平行空白，在760nm处测定吸光度。
2009年10月甄 攀等：吴茱萸及其炮制品中总酚酸含量测定第5期2009年10月河北北方学院学报(医学版)第5期
2 结果
2.1 吸收曲线
精密吸取对照品溶液、供试品溶液各适量，按1.2.4总酚酸测定方法显色后，从400nm到800nm扫描，每隔10nm(峰值时隔2nm)读一次吸光度。以吸光度为纵坐标，波长为横坐标作图，得到吸收曲线(图1)。在760nm处有较大吸收，因此选定760nm作为检测波长。
图1 对照品和样品的吸收曲线
1.样品 2.绿原酸对照品2.2 工作曲线
精密称取绿原酸3.57mg，用无水乙醇定溶至10mL，分别精密吸取50、100、200、300、400、500μL，按1.2.4法测定吸光度，以吸光度为纵坐标，绿原酸的浓度为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为A=0.0811c+0.0041，r=0.9992，在0.714～7.140μg/mL范围内呈线性关系。
2.3 显色稳定性试验
精密吸取对照品溶液、供试品溶液各适量，按1.2.4总酚酸测定方法显色后，分别于5、10、15、20、25、30、35、40min测定吸光度。吸收值随放置时间的延长有明显减小的趋势，但在40min内基本稳定，RSD=3.67%。显色后尽可能在30min内完成测定。
2.4 精密度试验
精密吸取对照品溶液适量，按1.2.4总酚酸测定方法显色后，于760nm测定吸光度。吸光度的RSD=0.18%，精密度较好。
2.5 重复性试验
分别称取同一批生吴茱萸6份，每份约为0.1g，精密称定，按1.2.3法制成供试品溶液，分别吸取360μL于6个25mL容量瓶中，按1.2.4方法测定吸光度，利用工作曲线计算总酚酸含量，RSD为3.5%，说明方法的重复性较好。
2.6 回收率实验
样品与标准品以1∶1，2∶1，4∶1混合，按1.2.4方法测吸光度，计算回收率，分别为101.75%、100.13%、102.44%，平均回收率为101.44%，RSD为1.2%。
2.7 含量测定
2.7.1 吴茱萸生药总酚酸含量测定 实验中测定了两批吴茱萸总酚酸的含量。分别称取吴茱萸0.1g，精密称定，各3份，按1.2.3方法制成供试品溶液，然后取25mL滤液稀释至50mL，取1mL上样，按1.2.4方法测定含量，结果如表1。表1 吴茱萸生药总酚酸含量
2.7.2 吴茱萸炮制品中总酚酸的含量测定 分别精密称取吴茱萸炮制品约0.1g，精密称定。按1.2.3法制成供试品溶液，然后取0.4mL，按1.2.4方法测定含量(见表2)。表2 炮制后吴茱萸中总酚酸含量
3 讨论
3.1 测定的两批吴茱萸药材中总酚酸的含量分别为29.89%和30.44%，经t检验差异没有统计学意义(P&>0.05)。吴茱萸炮制品中以醋制吴茱萸总酚酸含量最高，为44.20%，其次为甘草制吴茱萸，为39.69%，其余炮制品中总酚酸的含量都明显低于吴茱萸生药中的含量，经t检验，这些炮制品中总酚酸的含量与生药相比差异都有显著性意义(P&<0.01)，说明这些炮制方法使酚酸类成分损失严重。
3.2 测定总酚酸时，为了后续研究的需要，使用了绿原酸对照品，使得总酚酸含量数值较高。为了说明这个问题，实验中又使用没食子酸为对照品进行了校对，发现没食子酸的显色灵敏度提高约10倍，回归方程为A=0.7986c+0.0176(r=0.9996)。因此，如果以没食子酸表示，吴茱萸1中总酚酸的含量为3.02%，吴茱萸2中总酚酸的含量为3.07%。说明以不同的对照品表示，同一药品中总酚酸的含量不同，与文献[5，6]报道一致，可能是绿原酸和没食子酸所含的酚羟基数目不同造成的。
参考文献
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2 李玉红，徐强，高秀梅，等.丹酚酸与三七总皂苷不同配比对大鼠离体心脏冠脉流量的影响[J].天津中医药大学学报，2008，27(4):261
3 王丽君，张鑫毅，廖矛川.紫草总酚酸辅助米非司酮对妊娠大鼠的抗早孕作用[J].中国中药杂志，2008，33(20):2378
4 刘峰群，曹红，靳守东，等.比色法测定消癌平注射液中总酚酸的含量[J].华西药学杂志，2003，18(3):220
5 张颖，甄攀，马媛媛，等.吴茱萸中总皂苷、总黄酮和总酚酸的含量测定[J].河北北方学院学报(自然科学版)，2008，24(3):27
6 刘峰群，崔燕，凌海慧，等.不同对照品对通关藤注射液总酚酸含量测定的影响[J].药学服务与研究，2006，6(5):383