作者：贲卉，荣培晶，李 亮，刘伟哲，高昕妍，何伟
【摘要】 目的 通过观察不同时间针刺机体穴位一氧化氮(NO)含量的变化，探讨时间因素对针刺效应的影响。方法 对20例提供了知情同意书的健康志愿受试者进行测试。其中针刺组10例，男性5例，女性5例；非针刺组10例，男性5例，女性5例。年龄25～45周岁。分别选取手厥阴心包经的间使穴和足太阳膀胱经的委中穴作为针刺穴位，采用子午流注纳甲法推算穴位“开”、“合”时间，并分别在穴位“开”、“合”时进行针刺，同时在同侧经脉的郄门穴和承筋穴收集并检测NO含量的变化，比较不同时间针刺效应的差异。结果 针刺组“开穴”时NO含量高于“合穴”，非针刺组“开穴”与“合穴”之间差异无统计学意义。针刺组穴位NO含量高于非针刺组。结论 针刺可以使人体穴位NO含量增高，且针刺效应在“开穴”时比“合穴”时更加显著，说明利用时间针法治疗疾病可以提高针刺疗效。
【关键词】 针刺；子午流注纳甲法；穴位；一氧化氮
Abstract：Objective To investigate the effect of the time factor on acupuncture effects by observing the changes of nitric oxide (NO) content at the acupuncture points in different times. Method The experimental study was done on 20 cases of healthy volunteers who provide informed consent. Among 10 cases of acupuncture group， 5 cases were male， 5 cases were female. Among 10 cases of non-acupuncture group， 5 cases were male， 5 cases were female. The age was around 25 to 45 years. Jianshi on Pericardium Meridian of Hand Jueyin and Weizhong on Bladder Meridian of Foot Taiyang was acupunctured. “Active”/“silent” time of points were projected with Ziwuliuzhu Najia method. Acupuncture was done at the points “active”/“silent” respectively. The changes of NO content at the body points were detected. The difference of acupuncture in different time at the body points was compared. Result NO content in acupuncture group was higher at the “active” than at the “silent”， while there was no significant difference at non-acupuncture group. NO content was higher in acupuncture group than that in non-acupuncture group. Conclusion NO content at the points can be increased by acupuncture. Effect of acupuncture at acupoints “active” was more significant than at acupoints “silent”. It was proved that the therapeutic effect of acupuncture can be increased by using time acupuncture.
Key words：acupuncture；Ziwuliuzhu Najia method；acupoints；nitric oxide
子午流注纳甲法是临床上常用的一种针刺取穴方法，许多临床报道表明，采用子午流注纳甲法取穴治疗，其临床疗效优于一般辨证取穴治疗[1]。一氧化氮(NO)作为一种参与机体功能调节的重要信使分子和免疫调节分子，在人体的生理和病理活动中起着非常重要的作用。NO合成过多或不足与许多疾病的发生机制有关[2-3]。有研究表明，针刺可调节机体组织内NO含量及一氧化氮合酶(NOS)的活性[4-6]，为针刺机理的研究开辟新的方法。在此基础上，本研究拟通过测量NO在体表穴位的含量，探讨时间因素对针刺效应影响的作用机制。
1 资料与方法
1.1 对象选择及分组
于2006年分别对20例提供了知情同意书的健康志愿受试者进行测试，均为本单位职工。随机分为针刺组和非针刺组。针刺组10例，男5例，女5例；年龄25～45岁。非针刺组10例，男5例，女5例；年龄25～45岁。
1.2 穴位选择及操作
根据子午流注纳甲法开穴时间表选取穴位[7]。分别选取上肢、阴经代表穴——手厥阴心包经的间使和下肢、阳经代表穴——足太阳膀胱经的委中，在开穴时给予针刺；同时选取同侧同一经脉上的郄门和承筋作为NO的微透析部位，见图1。
针刺选用0.25 mm×25 mm毫针，轻刺入每个穴位约5～10 mm，以60次/min的频率捻转行针2 min，直到得气。留针20 min，每5 min行针1次。停针后立即进行NO收集，收集时间为20 min。非针刺组不予针刺，NO采集和测定方法同针刺组。
1.3 一氧化氮收集与测定
所有受试者在收集承筋穴位透析液时，采取俯卧位于诊疗台上。在收集郄门穴位透析液时，身体保持坐姿，手臂与心脏维持在同一水平。室温保持在25～27 ℃。女性受试者避开月经期。针刺前所有受试者需静坐30 min，心情放松。针刺前和针刺后各测量2次血压和心率，所有受试者的血压和心率经2次测量均在正常范围。
收集前先用无菌蒸馏水擦拭郄门和承筋，以保证穴位清洁，然后将自行研制的无菌收集管(0.5 cm×3 cm，纵向开口)分别贴附在受试者郄门和承筋上。注意塑料管两端要密封，管壁要与皮肤紧密接触，避免液体渗出。然后将NO清除化合物4甲基3氧化二苯(PTIO)以1∶9的比例溶解于透析底液VanadiumⅢ/HCl中进行稀释，再将稀释后的溶液注入无菌塑料管内。无菌管贴附于皮肤穴位表面20 min以吸收局部皮下NO，然后将收集管中的透析液抽出注入另一无菌管内保存待测。
采用化学发光法[8-9]，使用NO测定仪(NOA280i，美国通用电气公司生产)，通过测定NO的稳定代谢终产物硝酸根(NO3-)和亚硝酸根(NO2-)的含量来间接反映NO含量的变化[10]。此方法具有较高灵敏度，是目前常用的检测方法之一。
1.4 统计学方法
所有数据采用—x±s表示。使用通用的数据统计软件对数据进行处理，以独立t检验对数据进行显著性分析，以P＜0.05作为差异有统计学意义的检测标准。
2 结果
2组NO含量的比较见表1。可见，针刺组穴位NO含量普遍高于非针刺组，差异有统计学意义。承筋在合穴时，针刺组NO含量高于非针刺组，但差异无统计学意义。穴位在“开”/“合”状态下NO含量比较，针刺组穴位的NO含量在“开穴”时高于“合穴”，差异有统计学意义(t郄门＝1.55，t承筋＝1.03，均P＜0.05)，而非针刺组“开穴”与“合穴”比较差异无统计学意义(t郄门＝0.26，t承筋＝0.43，均P＞0.05)。表1 2组开合状态下穴位NO含量比较(略)
3 讨论
子午流注针法是中国古代医家提出的一种按照时间规律进行取穴的针刺疗法，是根据人体气血脏腑经络的日、时开穴规律配合天干、地支、阴阳五行，由五腧穴组成的一种逐日按时开穴治病的方法。影响针灸疗效有许多因素，其中重要的因素之一就是时间因素。中医认为，时间因素对于机体最基本的调节作用在于，经气沿着经络每日按着一定的时间规律循环往复，有时亏(acupoint ebb)，有时盈(acupoint flow)，犹如潮涨潮落，调控着人体阴阳平衡。现代时间生物医学研究表明，人体机体内各种生理、生化活动几乎都近似昼夜节律，人体对相同强度的刺激也随着昼夜节律的周期而反应有所不同。
多年来关于子午流注不断有临床应用的相关报道及理论和实验研究，特别是近年来，这一理论越来越多地受到人们的关注。大量临床报道证实，按照子午流注时间取穴法针刺，对于临床治疗痛证，如原发性痛经[11]、头痛[12]、胃痛[13]及其他以疼痛为主要症状的疾病时[14]，以及在治疗中风后遗症[15-16]、周围性面神经麻痹[17-18]、慢性胃炎[19]等疾病时，均取得了较好效果。因此，子午流注针法的疗效及对临床的指导意义是应该肯定的。
NO是一种具有生物活性的气体小分子，一种可高度弥散的自由基，其化学性质活泼，在常温下极易和空气或氧气反应生成棕色的NO2。NO具有高脂溶性，极易穿过细胞膜扩散到机体的各个部位，参与机体生理与病理功能的调节，是一种重要的信使分子和效应分子[20]。有研究表明，NO在治疗疾病过程中具有复杂的双相调节作用。它参与血管舒缩状态的调节、免疫功能的调制以及神经信息的传递等[21-22]。不仅如此，NO可能是一种致敏性生物活性化学物质，在针刺治疗中，由于NO的参与和适度的表达，可提高组织敏感度，因而增强针刺的治疗作用。本研究根据中医经络气血的盈亏理论，采用子午流注纳甲法择时取穴，运用NO微量透析法，以人体体表穴位NO含量为指标，观察不同时间针刺机体穴位上的反应。
结果显示，针刺组体表穴位NO含量普遍高于非针刺组。由于NO可参与神经细胞间的信号转导[21]，因此，机体穴位NO表达的增加，使穴位相对敏感化，功能活性增强，从而发挥针刺的治疗和调节作用。从结果还可以看出，针刺可以使“开穴”穴位上的NO含量明显升高，与“合穴”比较有统计学意义(P＜0.05)，说明穴位在“开”的状态时，穴位点的机能状态比较“活跃”，针刺效应比较强，而在“合”的状态时则表现得相对较弱。在非针刺对照组，“开穴”与“合穴”之间的差异没有统计学意义。因此，我们认为，穴位在处于“开穴”时，相对于“合穴”是保持一种基础性活跃态势。当不给予针刺时，“开穴”上的活跃态势表现为“隐性”，与“合穴”无明显差异。而一旦受到针刺的适宜刺激，“开穴”穴位将被“激活”，“合穴”则仍然处于相对“沉寂”状态。可见，“开穴”与“合穴”在功能上存在差异，是有一定物质基础的。所以，按子午流注时间方法取穴，在“开穴”时施以针刺，会收到比“合穴”更好的治疗效果。
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