【摘要】 目的 观察乌腺金丝桃提取物对小鼠缺血心肌的保护作用。方法 采用异丙肾上腺素制备小鼠心肌缺血模型，检测乌腺金丝桃提取物对小鼠缺血损伤后耐缺氧存活时间、血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)水平及心肌组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的影响。结果 与模型组相比，乌腺金丝桃提取物能够延长小鼠缺血损伤后耐缺氧存活时间，降低血清中LDH、CK水平，增加心肌组织SOD活性，减少MDA含量。结论 乌腺金丝桃提取物对异丙肾上腺素所致小鼠心肌缺血具有抵抗作用。
【关键词】 乌腺金丝桃；心肌缺血；乳酸脱氢酶；磷酸肌酸激酶；超氧化物歧化酶；丙二醛；小鼠
Abstract：Objective To investigate the protective effects of Hypericum attenuatum Choisy. extract on experimental myocardial ischemia injury in mice. Methods The myocardial ischemia injury model was induced by isoproterenol in mice. The survival time of mice， the activities of LDH and CK in serum， the activity of SOD and level of MDA in myocardium were all measured. Results Compared with model group， Hypericum attenuatum Choisy. extract can prolong the survival time of mice after injured by isoproterenol in the close normobaric hypoxia， and decrease the activities of LDH and CK in serum. It can also increase the activity of SOD and decrease the level of MDA in myocardium. Conclusion Hypericum attenuatum Choisy. extract has protective effects on myocardial ischemia induced by isoproterenol in mice.
Key words：Hypericum attenuatum Choisy.；myocardial ischemia；LDH；CK；SOD；MDA；mice
乌腺金丝桃为金丝桃科金丝桃属植物，在内蒙古、黑龙江省等部分地区俗称稳心草，以全草入药。本实验采用异丙肾上腺素制备小鼠心肌缺血模型，主要观察乌腺金丝桃提取物对小鼠心肌缺血损伤的保护作用。
1 实验材料
1.1 动物
昆明种小鼠120只，雌雄各半，体重(20±2)g，黑龙江中医药大学实验动物中心提供，合格证号：黑动字第P0010106。标准饲料，自由饮食。
1.2 药物
乌腺金丝桃提取物的制备：将乌腺金丝桃原药材阴干品粉碎成粗粉，采用乙醇提取，除去药渣，提取液减压浓缩后，上样于大孔树脂柱上，再以浓度为70%、体积为4倍大孔树脂柱体积的乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，即得乌腺金丝桃提取物。阳性药普萘洛尔由山西云鹏制药有限公司提供，批号20060801。
1.3 主要试剂
盐酸异丙肾上腺素，上海禾丰有限公司生产，批号5E20009。钠石灰，上海陆都化学试剂厂生产，批号20020128。血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。
1.4 仪器
Medlab生物信号采集处理系统：南京美易科技有限公司；生化分析仪Lisa 300 plus：法国HYCEL；722型光栅分光光度计：山东高密分析仪器厂；KDC-40低速离心机：科大创新股份有限公司中佳分公司；DY89-Ⅱ电动玻璃匀浆机：宁波新芝生物科技股份有限公司。
2 实验方法
2.1 心肌缺血小鼠常压耐缺氧实验
昆明种小鼠60只(雌雄各半)，随机分为6组，每组10只，分别为实验药物高、中、低剂量组及阳性药物组、模型组、空白组。实验药物组分别给与乌腺金丝桃提取物0.4、0.2、0.1 g/kg，阳性药物组给与普萘洛尔0.03 g/kg，模型组、空白组给与等体积的生理盐水，灌胃给药7 d，1次/d。第6日给药30 min后，实验药物组、普萘洛尔组及模型组均颈背部皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素20 mg/kg[1]，空白组注射等体积的生理盐水，1次/d，共2 d。末次注射15 min后将小鼠放入装有25 g钠石灰的250 mL密闭广口瓶中，记录从盖住瓶塞到小鼠停止呼吸的持续时间。
2.2 心肌缺血小鼠血清乳酸脱氢酶、磷酸肌酸激酶水平及心肌组织中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量的测定
昆明种小鼠60只(雌雄各半)，分组、给药同上，第5日给药30 min后，实验药物组、阳性药物组及模型组小鼠于颈背部皮下多点注射盐酸异丙肾上腺素20 mg/kg[2]，空白组皮下注射等体积的生理盐水，连续注射3 d，1次/d，制备小鼠心肌缺血模型，末次注射2 h后，小鼠眼球采血，分离血清，测定LDH、CK活性。并迅速取出完整心脏，心肌组织在4 ℃下匀浆，3 500 r/min离心提取上清液，测定SOD活性及MDA含量。
3 统计学方法
实验数据用x±s表示，计量资料用t检验，计数资料用χ2检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。
4 结果
(见表1～表3)表1 乌腺金丝桃提取物对缺血小鼠常压耐缺氧时间的影响(略)注：与模型组比较，※P＜0.05，※※P＜0.01(下同)表2 乌腺金丝桃提取物对缺血小鼠血清中LDH、CK水平的影响(略)表3 乌腺金丝桃提取物对缺血小鼠心肌组织中SOD活性及MDA含量的影响(略)
5 讨论
本实验采用小鼠颈背部皮下注射异丙肾上腺素制备心肌缺血模型。异丙肾上腺素作用于心脏β受体，通过加快心率，增强心肌收缩力，使心肌耗氧量显著增加，从而引起心肌耗氧量增加性缺血[3]。由于缺血和缺氧相伴，本研究还进行了心肌缺血小鼠常压耐缺氧实验。小鼠在常压缺氧状态下存活时间可反映机体对周围环境缺氧的耐受能力，小鼠注射异丙肾上腺素后在常压缺氧状态下会明显增加心肌耗氧量，造成心肌缺氧，缩短小鼠生存时间[4]。LDH和CK的活力可作为评价心肌细胞损害程度的重要指标。心肌缺血或心肌受损时，导致缺血心肌LDH和CK的释放增加[5]。MDA是自由基膜脂质过氧化产物，MDA的高低间接反映了机体细胞受自由基攻击的严重程度，是评价心肌缺血损伤的指标之一[6]。SOD是机体防御新陈代谢及其他生命活动中氧自由基损伤和破坏的抗氧化酶，大量氧自由基生成及脂质过氧化反应是心肌缺血损伤的主要机制之一[7]。
本研究采用异丙肾上腺素复制小鼠心肌缺血模型，观察乌腺金丝桃提取物对其的保护作用。结果表明，乌腺金丝桃提取物能够降低血清LDH、CK水平，提高小鼠心肌组织中SOD活性，降低 MDA含量。同时，心肌缺血小鼠常压耐缺氧实验结果表明，乌腺金丝桃提取物能够延长心肌缺血小鼠密闭条件下的存活时间，提高心肌缺血小鼠耐缺氧能力。两项结果提示，乌腺金丝桃提取物对实验性心肌缺血模型确有一定改善作用，其具体作用机制有待于进一步研究。
参考文献
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