作者：廖菁，黄政德，胡华，陈聪
【摘要】 目的 研究加味丹参饮对大鼠实验性心肌缺血损伤的抗凝血作用。方法 采用结扎冠状动脉左降支的大鼠心肌缺血模型，观察加味丹参饮高、中、低剂量(8.24、4.12、2.06 g/kg)对造模后大鼠活化凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、血小板粘附率、全血血小板聚集、血栓形成长度和血栓干、湿重以及纤维蛋白原(Fg)含量的影响。结果 与造模组比较，加味丹参饮高剂量组对PT和TT缩短、纤维蛋白原含量降低均有显著的抑制作用(P＜0.05)；加味丹参饮高、中剂量组能明显抑制二磷酸腺苷(ADP)和胶原诱导的血小板聚集(P＜0.01，P＜0.05)；加味丹参饮高、中、低剂量组均能显著降低血栓形成长度和干、湿重(P＜0.01，P＜0.05)。结论 加味丹参饮对大鼠实验性心肌缺血具有显著保护作用，可能与其抗凝血作用密切相关。
【关键词】 加味丹参饮；心肌缺血损伤；抗凝血作用；大鼠
Abstract：Objective To study the anticoagulation effects of Supplemented Salvia Beverage (SSB) on myocardial ischemia in rats. Methods Rat myocardial ischemia model was induced by occluding the left anterior descending coronary artery， the effects of SSB (8.24， 4.12， 2.06 g/kg) on the activated partial thromboplastin time (APTT)， prothrombin time (PT)， thrombin Time (TT)， platelet adherence rate， platelet aggregation， length of thrombus and the dry and wet weight of thrombus， as well as amount of Fibrinogen (Fg) were observed. Results Compared with model group， the shortening of PT and TT， and the decrease of Fg were obviously suppressed in high dosage SSB group (P＜0.05). The platelet aggregation induced by Adenosine Dimonophosphate (ADP) and collagen was suppressed significantly in high and middle dosage SSB group respectively (P＜0.01， P＜0.05). The length of thrombus was shortened and the dry and wet weight of thrombus were lightened obviously in all dosage groups (P＜0.01， P＜0.05). Conclusion Anticoagulation effects of Supplemented Salvia Beverage may play a key role in the myocardial protection.
Key words：Supplemented Salvia Beverage；myocardial ischemia；anticoagulation effect；rat
缺血性心脏病多发生于40岁以后，是人类疾病死亡的三大原因之一，对其防治和深入研究一直是医学领域的重点。现代医学认为，缺血性心脏病的最主要原因——动脉粥样硬化的最初病变是在该处形成微小血栓，并逐渐发展为局限性斑块，在此基础上，缺血性心脏病特别是心肌梗死发生时，由于冠状动脉内存在动脉粥样硬化斑块，使继发性血栓形成，血栓堵塞管腔，而导致急性缺血、缺氧甚至梗死。因此，与血小板相关的凝血、纤溶系统的异常在缺血性心脏病发生发展过程中起着极为重要的作用。加味丹参饮是经过长期临床应用总结出的防治缺血性心脏病的有效方剂。本工作在前期临床及实验研究基础上，采用大鼠心肌缺血损伤模型观察加味丹参饮对缺血心肌的抗凝血作用，为其临床进一步应用提供必要的实验依据。
1 实验材料
1.1 动物
健康SD系大鼠84只，雌雄各半，220～300 g，湖南中医药大学实验动物中心提供。
1.2 药物和试剂
加味丹参饮浸膏粉：水提浸膏粉7 500 g，挥发油粉100 g，实验前用蒸馏水配成1 g/mL浓度备用，湖南中医药大学制剂教研室提供；恬尔心片：上海延安万象药业股份有限公司生产，批号010803；复方丹参片：广州白云山中药厂生产，批号04061013；二磷酸腺苷(ADP)：北京化学试剂采购供应站提供，批号040601；胶原：BD Biosciences公司生产，批号008981。血浆纤维蛋白原试剂盒：美国Sigma公司产品；活化凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)测定试剂盒：均由上海太阳生物技术公司提供。
1.3 仪器
DH-8型人工呼吸机(浙江大学医学实验仪器厂)；MP150型十六导生理记录仪(美国MOPAC公司)；LBY-NJ2型全血血小板聚集仪(北京普利生公司)；XSN-RⅡ型体外血栓形成血小板粘附两用仪(江苏省无锡电子仪器二厂生产)；Start-4型半自动四通道血凝仪(法国STAGO公司生产)等。
2 实验方法
2.1 分组及造模
取同批SD大鼠84只，雌雄各半，体重为220～300 g，按性别、体重分层随机分为7组，每组12只，即假手术组、模型组、恬尔心(对照)组、复方丹参片(对照)组及加味丹参饮高、中、低剂量组。各组大鼠均灌胃给予相应药液3 d(1次/d)，灌胃容量均为10 mL/kg体重。末次给药30 min后开胸。其中假手术组予生理盐水，实验时开胸不结扎冠状动脉。模型组予生理盐水；复方丹参片组予复方丹参片药液1.12 g原药材/kg(按体表面积换算，相当于60 kg成年人临床等效剂量的2倍)；恬尔心组予恬尔心25.00 mg/kg(按体表面积换算，相当于60 kg成年人临床等效剂量的2倍)；加味丹参饮高、中、低剂量组分别给予加味丹参饮药液8.24、4.12、2.06 g/kg(按体表面积换算，相当于60 kg成年人临床等效剂量的4、2、1倍)。以上6组实验时均结扎冠状动脉左降支。
2.2 指标测定
大鼠缺血损伤后120 min，从颈总动脉取血，以3.8%的枸橼酸钠1∶9抗凝，4 ℃、3 000 r/min离心15 min分离血浆，采用磁珠法在半自动四通道血凝仪上测定APTT、PT和TT。采用旋转玻球法，在显微镜下计数粘附前后血小板数量，再根据如下公式计算：血小板粘附率(%)＝(粘附前血小板数－粘附后血小板数)/粘附前血小板数×100%。采用电阻法测定全血血小板聚集，聚集诱导剂分别为ADP和胶原。观察各组大鼠血浆纤维蛋白原(Fg)含量的变化。颈总动脉采血不经抗凝直接加入体外血栓形成管中，迅速置于体外血栓形成仪上，模拟体内血流状态，15 min后测量血栓长度，并称取血栓湿重和干重。
3 统计学方法
所有数据均采用x±s表示，以方差分析比较，组间比较用q检验。
4 结果
(见表1～表3)表1 加味丹参饮对实验性心肌缺血大鼠血浆APTT、PT和TT的影响(略)注：与假手术组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与复方丹参中、低剂量组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与恬尔心组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01(下同)表2 加味丹参饮对实验性心肌缺血大鼠血小板功能的影响(略)表3 加味丹参饮对实验性心肌缺血大鼠体外血栓形成和血浆Fg含量的影响(略)
5 讨论
加味丹参饮由丹参、檀香、赤芍、川芎、当归等7味中药组成，是在清·陈念祖《时方歌括》之丹参饮基础上化裁而成。陈修园谓：“丹参饮治心痛、胃痛诸痛多效。”因加味丹参饮主要用治缺血性心脏疾病，病位在心不在胃，故去原方之砂仁，加川芎、赤芍、当归等。方中重用丹参为君， 其用量是余药之3倍，味苦性平微寒，专入血分，内达脏腑而化瘀滞，外利关节而通脉络；檀香味辛芳香，善入气分，行气化滞，散寒止痛；再辅以川芎、赤芍、当归等，旨在加强活血祛瘀、行气止痛之功。前期临床与实验研究已证明，加味丹参饮对冠心病患者有较好降脂作用；对家兔食饵性动脉粥样硬化具有显著的防治作用；并具有模拟缺血预处理样的心肌保护作用[1-3]。
研究表明，心肌缺血患者体内血液处于高凝状态，易形成血栓。冠心病心绞痛的发病与血栓形成、严重进行性加重的冠脉阻塞、冠脉痉挛及收缩、炎症、心肌耗氧增加等密切相关。高脂血症、氧自由基损伤、高血压和机械损伤等引起血管内皮细胞损伤，继之活化的血小板粘附于损伤处并释放生长因子，进而促进平滑肌细胞、单核巨噬细胞和成纤维细胞的增生及向内皮膜下迁移，并可促进血浆中脂质进入血管壁。同时，内皮细胞受损，血管活性物质如内皮素(ET)、一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)、血栓素(TXA2)合成分泌失调，ET、TXA2浓度升高，NO、PGI2浓度降低，而致血管收缩、血小板活化和聚集性增高，导致凝血功能亢进。本实验结果亦表明，大鼠在心肌缺血损伤时，血浆PT与TT均显著缩短，血小板粘附性和聚集性均显著增强，血栓形成长度及干、湿重均较模型组显著增加。而加味丹参饮对PT、TT的缩短、血小板粘附率的增高、ADP和胶原诱导的血小板聚集以及血栓形成等均有显著的抑制作用，并能明显抑制Fg含量的降低。本研究结果显示，加味丹参饮具有显著抑制凝血功能亢进，对抗实验性心肌缺血大鼠血小板的激活、粘附和聚集，抑制血栓形成，降低体内凝血活性，增强纤溶活力的作用，这可能是其对抗心肌缺血损伤的机制之一。
参考文献
[1] 黄政德，张玉生，葛金文.加味丹参饮对家兔动脉粥样硬化形成影响的研究[J].湖南中医学院学报，2002，22(4)：4－6，20.
[2] 黄政德，张玉生，葛金文.加味丹参饮预处理对缺血再灌注损伤家兔心电图改变的影响[J].湖南中医药导报，2003，9(11)：56－58.
[3] 黄政德，葛金文，张玉生.加味丹参饮对家兔缺血再灌注损伤心肌延迟保护作用的研究[J].湖南中医杂志，2003，19(6)：52－53.