作者：石继连，何群，杨梓懿，刘平安
【摘要】 目的 建立复方蛇床酊中蛇床子素含量的高效液相色谱测定方法。方法 采用Hypersil ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(70∶30)，流速为1.0 mL/min；测定波长为322 nm；柱温为室温。结果 蛇床子素在0.018～0.126 μg范围与峰面积呈良好的线性关系(r＝0.999 9)，平均回收率为98.55%，RSD＝1.45%。结论 该方法操作简便快速、准确可靠，可用于复方蛇床酊中蛇床子素含量的测定。
【关键词】 复方蛇床酊；蛇床子素；高效液相色谱法；含量测定
Abstract：Objective To establish the determination method for osthol in Compound Shechuang Tincture. Methods Hypersil ODS column was used and methanol-water (70∶30) was used as a mobile phase. The flow rate was at 1.0 mL/min and the detection wave-length was at 322 nm. Results Osthol had a good linear relationship between 0.018～0.126 μg (r＝0.999 9). The average recovery was 98.55% and RSD was 1.45%. Conclusion This method is simple， rapid and accurate. It can be applied to determining osthol in Compound Shechuang Tincture.
Key words：Compound Shechuang Tincture；osthol；HPLC；content determination
复方蛇床酊为湖南中医药大学药学院研制的外用酊剂，由蛇床子、土荆皮、黄柏等中药组成，具有清热解毒、燥湿止痒、杀虫的功能，主治湿热带下及各种妇科炎症、皮肤瘙痒及湿疹等。蛇床子素为方中君药蛇床子的主要有效成分，本试验采用HPLC法对其含量进行测定，现报道如下。
1 仪器与试药
Waters 1525/2487高效液相色谱仪，Breeze色谱工作站；MICROLITER#702微量进样器(HAMILTON公司)。蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号110822-200406)；复方蛇床酊(自制)；实验中药材购于长沙市药材公司。甲醇为色谱纯；乙醇为分析纯；水为重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Hypersil ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm，5 μm，大连依利特分析仪器有限公司)；流动相：甲醇-水(70∶30)；流速：1.0 mL/min；测定波长：322 nm；柱温：室温；进样量为5 μL。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取蛇床子素对照品适量，加乙醇制成9.0 μg/mL的溶液，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密吸取复方蛇床酊0.2 mL，置10 mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 阴性对照溶液的制备
以去掉蛇床子的复方蛇床酊处方，按复方蛇床酊的生产工艺制备阴性药液，再按“2.3”项下方法制备阴性对照溶液。
2.5 干扰试验
照上述色谱条件，取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各5 μL，分别注入色谱仪。供试品色谱图中，在与对照品色谱图相应的位置上，有一相同的色谱峰，而阴性对照溶液色谱图在此处无干扰(见图1)。
2.6 线性关系考察
分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、12、14 μL进样，以峰面积对进样量(μg)进行线性回归，得回归方程：Y＝4.392×106X－6 036.38，r＝0.999 9。表明蛇床子素在0.018～0.126 μg与峰面积呈良好的线性关系。
2.7 精密度试验
用同一供试品溶液重复进样测定5次，以峰面积计算，RSD＝1.06%。
2.8 重复性试验
取同一批次的复方蛇床酊，按“2.3”项下方法分别制备5份供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，结果平均含量为0.020 3 mg/mL，RSD＝0.94%。
2.9 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别在制备后0、2、4、6、12、16、24 h进样，测定峰面积，计算，RSD＝1.21%(n＝7)。表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.10 加样回收率试验
精密吸取已知蛇床子素含量(21.74 μg/mL)的复方蛇床酊0.2 mL共6份，按“2.3”项下方法制备，分别置6个10 mL的量瓶中，精密加入对照品溶液适量，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，按上述色谱条件进行测定，计算回收率，结果见表1。表1 加样回收率试验结果（略）
2.11 样品测定
精密吸取各供试品溶液(4批各3份)5 μL，按上述色谱条件进行测定，结果见表2。表2 复方蛇床酊中蛇床子素的含量测定结果(略)
3 讨论
用紫外分光光度计对文中试验条件下蛇床子素对照品溶液作了波长扫描，发现其最大吸收波长在321.5 nm，在
参考文献
[1-2]后，选用322 nm作为检测波长。笔者曾试验了几种不同的流动相系统，在本试验所确定的色谱条件下，用甲醇作流动相较2005版《中华人民共和国药典》(一部)[3]规定的乙腈简单且经济，测定时间比较短(约7.5 min出峰)，蛇床子素与其他成分能达到基线分离，理论板数按蛇床子素计大于3 000。
参考文献
[1] 刘灿群，黄香连.HPLC法测定青柏洁身洗液中蛇床子素的含量[J].中药材，2004，27(5)：380.
[2] 黄美兰，王 希，黄荣林.高效液相色谱法测定癣湿药水中蛇床子素的含量[J].广东药学，2003，13(3)：4.
[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.219.