作者：李满生，徐厚谦，金华，邓兴本，牛彩琴，颜春鲁，杨维杰
【摘要】 目的 观察寿聪胶囊对老年性痴呆(Alzheimer disease，AD)模型大鼠行为学及脑组织中过氧化氢酶(CAT)、单胺氧化酶(MAO)活性的影响，探讨其作用机制。方法 选用Wistar雄性大鼠，随机分成空白对照组、模型对照组、脑复康组及寿聪胶囊低、高剂量组，每组9只。大鼠颈部注射D-半乳糖合并腹腔注射东莨菪碱制备AD大鼠复合模型，采用跳台法观察大鼠学习记忆能力，用分光光度法测定脑组织中CAT、MAO的含量。结果 寿聪胶囊能显著减少AD大鼠的错误次数、延长反应潜伏期，能显著提高模型大鼠脑组织中CAT的含量、降低MAO的含量。结论 寿聪胶囊可能通过提高CAT抗氧自由基水平及降低脑组织MAO活性的途径实现其对AD模型大鼠预防和治疗作用。
【关键词】 寿聪胶囊；阿尔茨海默病；学习记忆能力；过氧化氢酶；单胺氧化酶；大鼠
Key words：Shoucong capsule；Alzheimer disease；learning-memorial ability；CAT；MAO；rat
阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)是发生在老年期及老年前期的一种退行性疾病，以进行性记忆减退、认知障碍、人格改变为主要特征。近年来大量临床报道显示，中药复方制剂对AD的防治有较好的临床效果。本课题探讨寿聪胶囊对AD模型大鼠学习记忆功能及脑组织中过氧化氢酶(CAT)、单胺氧化酶(MAO)含量的影响，为寿聪胶囊临床防治AD提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物及分组
健康4月龄Wistar雄性大鼠45只，体重180～250 g，兰州医学院医学实验动物中心提供(医动字第14-006)。以随机数字表法随机分成空白对照组、模型对照组、脑复康组及寿聪胶囊低、高剂量组，每组9只。
1.2 药物及试剂
寿聪胶囊由甘肃中医学院附属医院药剂科提供(批号030102，0.5 g/粒)；D-半乳糖、东莨菪碱由上海恒信化学试剂有限公司提供(批号20030926、613K2102201)；脑复康由西安交大瑞鑫制药有限公司提供(乙酰胺吡咯烷酮，批号20031101)；CAT、MAO测试盒由南京建成生物工程研究所提供。
1.3 仪器
自制跳台仪；HANGPING电子称(型号：JY4001)，上海精科公司天平仪器厂；可控低温冰箱(型号：BCD-183)，青岛澳柯玛；电热恒温水浴锅(型号：HHS21-4)，上海医疗器械五厂；紫外分光光度仪(型号：LIV-120-02)，日本岛津仪器厂；高速离心机(型号：Primo LXT-64-01)，德国Kendro实验仪器厂。
1.4 造模与给药
第1周内，空白对照组、模型对照组给予等体积生理盐水，其余各组每日10 mL/kg 给药，脑复康组2.9 g/(kg·d)，浓度290 g/L、寿聪胶囊组0.54 g/(kg·d)，低浓度54 g/L、高浓度162 g/L。第2～4周，空白组、模型组给予等体积生理盐水，除空白组外其余各组给药同时颈部注射D-半乳糖[按5 mL/(kg·d)，浓度0.96%]。第5～6周，停D-半乳糖，改为腹腔注射东莨菪碱[2 mL/(kg·d)，浓度0.3 mg/mL]，最后1次给药2 h后，各组大鼠进行跳台测试[1-2]。
1.5 行为学测试
行为学测试用跳台法：将大鼠放置在跳台箱内，适应5 min后通电，从大鼠跳到安全台上开始记时，直到从安全台上跳下，此段时间为潜伏期；跳下时大鼠双足同时接触铜栅视为错误反应，训练5 min并记录5 min内的潜伏期和错误次数作为学习指标。在最后1次给药2 h后进行1次跳台测试，记录各组大鼠5 min内触电潜伏时间及错误次数。
1.6 标本采集和处理
在跳台后当天禁食，第2天每组随机选出8只大鼠(实验过程中共自然死亡2只)，1%戊巴比妥纳35 mg/kg腹腔注射麻醉后，行一侧颈总动脉插管采血后断头处死，于冰台上取出脑组织，用生理盐水冲洗，沿矢状缝切开，左半称重后加9倍生理盐水制成10%匀浆，以3 000 r/min离心15 min，取上清液，冻存待测。
1.7 过氧化氢酶、单胺氧化酶的检测
采用化学比色法测定CAT、MAO的活性，测定方法按照试剂盒说明程序进行。
1.8 统计学方法
数据统计采用SPSS11.0软件，各组数据以x±s表示，组间均数比较采用方差分析检验，P&<0.05或P&<0.01为有统计学意义。
2 结果
(见表1、表2)表1 各组大鼠学习记忆能力的比较(略)注：与空白对照组比较，**P&<0.001；与模型对照组比较，##P&<0.001 表2 各组大鼠脑组织匀浆中CAT、MAO含量的比较(略)注：与空白对照组比较，*P&<0.05；与模型对照组比较，#P&<0.05
3 讨论
AD是一种进行性退行性神经系统变性疾病，是老年人常见病和多发病，其病因和发病机制尚未明确。自由基损伤理论是AD衰老的主要学说，是导致其认知功能障碍的基本因素[3]。正常机体有一完整的抗氧化防御体系，抗氧化物之间相互联系、协同保护，能够防止自由基氧化反应，即体内酶性和非酶性抗氧化物总体水平。CAT是重要的自由基清除剂，对体内氧水平衡起重要作用[4]。它能清除体内过多的自由基，保护细胞膜结构和功能，防止神经元退化、变性、凋亡，延缓神经元的衰老，抑制脂褐素形成，维持学习记忆能力。MAO是大脑周围神经组织中一种十分重要的酶，不仅能提高有害的h3O2的水平，而且可以使单胺类神经递质含量下降，促进神经系统的老化过程，使老年人易患AD[5]。
中医学认为AD病位在脑，与心、肝、肾等脏密切相关。脑与心的关系，《医学衷中参西录》云：“人之神明有体用，神明之体藏于脑，神明之用出于心。”脑与肾的关系，肾藏精生髓以充养骨骼，脑为髓海，是精髓聚合之处，《灵枢·海论》曰：“海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒目无所见，懈怠安卧。”脑与肝的关系，《素问》云：“肝者，将军之官，谋虑出焉。”肝藏魂，正如张锡纯云：“肝肾充足则自脊上达之督脉，必然流通督脉者脑髓神经之所以也。”病机为肾虚精亏、痰瘀互阻。肾虚精亏为本，痰瘀互阻为标；肾虚精亏、脑失所养，故出现记忆、智能、精神等方面障碍；痰瘀阻窍构成智能障碍及AD的基本病理表现。在AD的发生发展过程中，肾虚精亏与痰瘀互阻相互联系，相互影响，互为因果，共同致病。AD的病理性质为本虚标实，虚实错杂。
寿聪胶囊是根据中医理论，并结合临床经验，采用补虚填精、解郁散结为治疗大法拟定的中药复方制剂，由何首乌、红参、岷当归、锁阳、鹿角胶、三七、丹参、泽泻、石菖蒲等组成。全方辨证与辨病相结合，标本兼顾，遣方用药，符合AD中医病机的特点。本实验采用颈部注射D-半乳糖致亚急性衰老合并腹腔注射东莨菪碱损伤M型胆碱能受体，制备复合的AD模型，这种复合模型较单因素AD模型更贴近其复杂的病理变化过程。本实验结果表明，寿聪胶囊能提高模型大鼠的学习记忆能力，提高模型大鼠脑内CAT的含量，降低MAO的活性，拮抗氧化反应，同时防止单胺类神经递质的减少，从而起到防治AD的作用。在防治AD方面，寿聪胶囊与脑复康效果近似，但更适合中医药防治AD具有整体调节、多靶点作用的优点。
参考文献
[1] 赖世隆，胡镜清.中医药防治老年性痴呆研究中几个关键问题的思考[J].广州中医药大学学报，2000，17(2)：100－105.
[2] 刘洁生，谢丽玲，洪 岸，等.神经元烟碱乙酰胆碱受体阻滞所致早老型痴呆动物模型的建立[J].卫生研究，1999，28(4)：218－220.
[3] 李绍平，李 晖.Alzheimer’s病的多病因相互作用与新药开发[J].国外医学·老年医学分册，1996，17(11)：15.
[4] 方朝晖.寿星宝对老年大鼠自由基代谢影响的实验研究[J].天津中医， 1998，15(1)：37－39.
[5] 殷 莹，田清涞.单胺氧化酶及其抑制剂与老年神经变性疾病[J].中国老年学杂志，1996，16(3)：187－189.