作者：张永志 许红 张一昕 周桦 吴翟 李昌
【摘要】 目的 观察消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠血清和肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响，以探讨消瘀化痰饮治疗NAFLD的作用机制。方法 采用高脂饮食喂饲大鼠复制NAFLD动物模型，实验分组为正常对照组、模型组、消瘀化痰饮高剂量组、消瘀化痰饮低剂量组和东宝甘泰对照组。以高、低剂量消瘀化痰饮和东宝甘泰进行干预，然后测定各组大鼠血清、肝组织中SOD活性及MDA的含量。结果 模型组大鼠血清、肝组织中SOD活性较正常组明显降低(P＜0.01)；MDA含量均较正常组明显升高(P＜0.01)。用药后各治疗组大鼠血清和肝组织中SOD活性明显升高(P＜0.05，P＜0.01)；MDA含量明显降低(P＜0.05，P＜0.01)。高、低剂量组在增强SOD活性和降低MDA含量方面的作用明显优于对照组(P＜0.05)。结论 消瘀化痰饮可显著提高大鼠SOD活性，降低MDA含量，能够清除自由基，提高机体抗氧化能力，以达到治疗脂肪肝的目。
【关键词】 脂肪肝 酒精性 丙二醛 超氧化物歧化酶 药物疗法
【Abstract】 Objective To observe the effect of Xiaoyu Huatan Liquid on the SOD activity and the MDA contents in the serum and hepatic tissue of NAFLD rats and explore the possible role of Xiaoyu Huatan Liquid in the therapy of NAFLD.Methods The model of NAFLD rats was established by feeding high fat forage. Then these rats were pided into normal control group， model group，high dose group， low dose group， and Dong Bao Gan Tai group (control group).Each treatment group was intervened by its own medicine. Then the SOD activity， the MDA contents in the serum and hepatic tissue were measured in all groups.Results The SOD activity in the serum and hepatic tissue of the model group were significantly reduced in comparison with those in the normal control group (P&<0.01).The MDA contents in the serum and hepatic tissue of the model group were all higher than those in the normal control group (P&<0.01).The SOD activity increased remarkably (P&<0.05，P&<0.01) and the MDA contents much lower (P&<0.05，P&<0.01) in the serum and hepatic tissue of each treatment group.The effect of increasing SOD activity and reducing MDA contents in the serum and hepatic tissue of high dose group and low dose group were more better than the control group (P&<0.05).Conclusions Xiaoyu Huatan Liquid has the effect of increasing the SOD activity and reduing MDA contents remarkably.It could remove the free radical and enhance body’s capability of anti-oxidation.
【Key words】 Fatty liver，Alcoholic，MDA，SOD，Therapy of TCM
消瘀化痰饮为治疗非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver diseases，NAFLD)的效方，既往药效学实验已证实消瘀化痰饮具有显著的调节血脂和抗脂肪肝作用［1］，但其作用机制尚不十分清楚。研究表明，氧应激与脂质过氧化损伤在NAFLD的形成和发展中具有一定的作用［2，3］。但是，有关中药对NAFLD氧化损伤影响的报道较少，本研究旨在通过观察消瘀化痰饮对NAFLD大鼠肝血清、肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响，以进一步探讨其作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物
健康雄性SD大鼠50只， 体质量180～200 g，由华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，动物合格证号：SCXC(鄂)2004-007。
1.2 药物及试剂
消瘀化痰饮，由河北中医肝病医院制剂室制备(课题组监制)，实验时，采用0.5%的羧甲基纤维素钠将其配制成所需浓度的混悬液。 东宝甘泰片，通化东宝药业股份有限公司出品，批准文号：h32024764。实验时用0.5%的羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的混悬液。SOD试剂盒(批号：20061124)、MDA试剂盒(批号：20061121)均购自南京建成生物工程研究所。
1.3 主要仪器
722型光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)，MSE-25型高速冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂)，分析天平(A&&D. Company. Limited. Tokyo.Japan)。
1.4 动物分组与造模
50只健康雄性SD大鼠，饲养于18～22℃明暗各12 h的清洁级动物实验室内，正常喂养1周后，随机分为5组，即正常对照组(简称正常组)、模型对照组(简称模型组)、消瘀化痰饮高剂量组(简称高剂量组)、消瘀化痰饮低剂量组(简称低剂量组)及阳性药(东宝肝泰)对照组(简称对照组)。动物造模参照文献［3］喂饲高脂饲料，高脂饲料由1.5%胆固醇、0.5%胆盐、10%猪油和88%基础饲料制成。除正常组喂饲普通饲料外，其余各组均给予高脂饲料，连续9周。
1.5 给药方法及标本处理
大鼠造模的同时，各组分别给予相应药物灌胃，给药剂量按药理实验方法学计算。消瘀化痰饮高、低剂量组分别按43.34、21.67 g/kg体质量的标准灌服，对照组按0.9 g/kg体质量的标准灌服，正常组和模型组灌服0.9%氯化钠注射液。各组每日灌胃1次，每次用药体积均按1 mL/100 g计算。实验9周末，最后1次给药后禁食12 h麻醉状态下取血，将血样低温离心，分离血清，密封，-20℃冷存待检。取血后迅速剖取肝脏，在肝脏最大叶距边缘0.5 cm处取适量肝组织用冰0.9%氯化钠注射液冲洗，滤纸吸湿后，称取湿重0.3 g左右，加入预冷的0.9%氯化钠注射液，冰水中制成10%匀浆，4℃ 4 000 r/min离心10 min，提取上清液，-20℃冷存待检。
1.6 检测指标及方法
SOD的检测采用黄嘌呤氧化酶法、MDA的检测采用硫代巴比妥酸(TBA)比色分析法，严格按试剂盒说明书检测。
1.7 统计学处理
数据用均数±标准差(±s)表示，采用单因素方差分析和q检验。统计分析用SPSS 12.0软件进行处理，以P＜0.05为有统计学意义。
2 结 果
各组大鼠血清及肝组织SOD活性和MDA含量的比较见表1。表1 各组大鼠血清和肝组织SOD活性和MDA含量的比较 （略）
由表1可见，模型组大鼠血清、肝组织中SOD含量均较正常组明显降低(P＜0.01)；给药后各治疗组血清、肝组织中SOD含量均低于模型组(P＜0.05，P＜0.01)；低剂量组与高剂量组血清、肝组织中SOD含量均高于对照组(P＜0.05)，而低剂量组、高剂量组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。模型组大鼠血清及肝组织中MDA较正常组均异常升高(P＜0.01)；给药后各治疗组均能显著降低模型大鼠血清及肝组织中MDA的含量，与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.01)；低剂量组与高剂量组血清、肝组织中MDA含量均高于对照组(P＜0.05)，而低剂量组、高剂量组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。
3 讨 论
3.1 消瘀化痰饮的组方依据
NAFLD在古代医籍中无此病名及相关的描述，根据其临床表现可归属于中医学肝痞、胁痛、肝着、肝壅、痰饮等范畴。课题组认为，NAFLD多由饮食失节，恣食肥甘厚味，损伤脾胃，使其运化失常，酿生痰浊，聚集体内，痰阻气滞，肝失调达，血脉瘀阻，痰瘀结于胁下所致。故痰瘀互结、肝脾失调为其主要病机，消痰化瘀、健脾疏肝为其有效治法。因此，精心筛选相关药物组成消瘀化痰饮，经临床应用疗效满意。方中泽泻、制半夏、海藻除水湿，消痰浊；丹参、郁金活血通络，祛肝经之瘀，增强肝脏血运；生大黄通腑导滞，降浊祛脂，与泽泻配用，分流疏导，使邪有去路；生山楂祛瘀消积；柴胡、决明子疏肝利胆，清肝经郁热；生黄芪、炒白术补气健脾，以助痰瘀的运降，而且也体现了“见肝之病，当先实脾”的治疗法则。诸药合用则清降痰浊瘀积，调节肝脾功能，从而达到抗脂肪肝的目的。
3.2 消瘀化痰饮可显著提高实验大鼠的抗氧化损伤能力
本研究显示，采用高脂饮食复制的大鼠NAFLD模型，其血清和肝组织中MDA含量较正常组明显升高，SOD活性较正常组明显降低(P＜0.0l)，表明模型组大鼠肝细胞耗氧量明显增加，体内产生大量自由基，脂质过氧化反应增强，致使其反应产物MDA增多。而肝脏脂肪变性又使得机体抵抗力降低，抗自由基能力减弱，不能产生足够的SOD，意味着机体进入失代偿状态，说明抗氧化能力下降是NAFLD的一个重要发病机制。给药后各治疗组大鼠血清和肝组织中MDA含量降低，SOD活性增强(P＜0.05，P＜0.01)，其中高、低剂量组在增强SOD活性和降低MDA含量方面的作用明显均优于对照组(P＜0.05)，提示消瘀化痰饮能显著提高大鼠SOD活性，降低氧自由基代谢产物MDA的含量，具有清除机体自由基，增强抗氧化能力的作用，可以调节和改善自由基代谢平衡，此可作为消瘀化痰饮治疗NAFLD的作用机制之一。
参考文献
［1］苗卉，魏翠萍，魏春娥，等.消瘀化痰饮对非酒精性脂肪肝大鼠脂质代谢和肝组织形态学的影响［J］.河北中医药学报，2007，22(2):3-5.
［2］王广华，邢象斌.非酒精性脂肪肝发病机制研究进展［J］.中国康复理论与实践，2004，10(4):243-244.
［3］郭秀丽，任莉，梁丕霞，等.非酒精性脂肪肝发病机制［J］.医师进修杂志，2005，28(9A):53-54.
［4］戴宁，曾民德，李继强，等.复方中药抑制非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450ⅡE表达的实验研究［J］.中国西医结合">中西医结合杂志，2000，20(6):453-455.