关于卵巢癌组织中uPA与PAI1 mRNA表达及意义

【摘要】 目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)和纤溶酶原激活剂抑制物1（PAI1）mRNA在卵巢癌组织中的表达及其临床意义。方法 采用逆转录聚合酶链反应技术，检测38例卵巢癌、21例卵巢良性上皮性肿瘤及17例正常卵巢组织中uPA及PAI1 mRNA的表达，并分析其与病理分化程度的相关性。结果 uPA 及PAI1 mRNA在卵巢癌中的表达水平均较卵巢良性上皮性肿瘤、正常卵巢组织显著升高(F=184.51、51.00，q=11.34～26.69， P&<0.05)。在不同分化程度的卵巢癌组织中uPA 及PAI1 mRNA的表达量随肿瘤分化程度的降低而增加(F=110.62、38.43，q=3.10～6.86，P&<0.05)。结论 卵巢癌组织中uPA及PAI1 mRNA呈高表达，且与卵巢癌的病理分化程度相关。
【关键词】 卵巢肿瘤 尿纤溶酶原激活物 纤溶酶原灭活剂 基因表达
［ABSTRACT］ObjectiveTo explore the expressions and their significance of urokinasetype plasminogen activator (uPA) and plasminogen activator inhibitor1(PAI1) in ovarian cancer.MethodsThe expressions of uPA mRNA and PAI1 mRNA were evaluated by RTPCR in the tissues of ovarian cancer (n=38)， epithelial benign tumor (n=21) and normal ovary (n=17). ResultsThe expressions of uPA mRNA and PAI1 mRNA in the cancer tissue were higher than that in the benign tumor and normal ovarian tissue (F=184.51，51.00; q=11.34-26.69; P&<0.05). A negative correlation existed between the expressions of uPA mRNA and PAI1 mRNA and the differentiation of the cancer， the higher of expressions of uPA mRNA and PAI1 mRNA， the lower differentiation of ovarian cancer were observed (F=110.62，38.43; q=3.10-6.86； P&<0.05).ConclusionuPA mRNA and PAI1 mRNA were overexpressed in ovarian cancer， and negatively correlated with the pathologic differentiation.
　　［KEY WORDS］ovarian neoplasms; urinary plasminogen activator; plasminogen inactivators； gene expression
　　肿瘤细胞的浸润和转移能力与其降解细胞外基质(ECM)有关。细胞外基质降解和基膜破坏是肿瘤浸润、转移的必要条件，其中尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）系统介导的细胞外基质水解起着重要作用［1］。本研究采用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)测定uPA及纤溶酶原激活剂抑制物1（PAI1）mRNA在卵巢癌中的表达，探讨其与临床病理分化程度的关系。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　2005年1月～2006年5月，收集青岛大学医学院附属医院妇科治疗的病人的标本共76例，其中17例为因子宫肌瘤行手术治疗病人的正常卵巢组织，病人年龄27～52岁，平均为46.4岁。21例为卵巢良性上皮性肿瘤组织，病人年龄21～63岁，平均50.2岁；其中浆液性乳头状囊腺瘤13例，黏液性乳头状囊腺瘤8例。卵巢恶性肿瘤组织38例，病人年龄27～67岁，平均59.6岁；其中浆液性乳头状囊腺癌26例，黏液性乳头状囊腺癌12例；依据病理分化程度，分为高分化组8例，中分化组11例和低分化组19例。从术中直接取得新鲜组织标本后，立即保存在-70 ℃低温冰箱。每份标本都经病理检查证实。
　　1. 2 方法
　　1.2.1 总RNA抽提 每份冷冻标本取100 mg，剪碎，加入Trizol溶液1 mL裂解，按 Trizol 一步法抽提得到总RNA，紫外线分光光度计检测RNA浓度和纯度，放置-70 ℃冰箱保存。
　　1.2.2 RTPCR反应 取0.18 μg总RNA，在50 μL体系中扩增，引物由上海生工生物工程公司合成［2］。uPA引物序列 Primer 1: 5′ACTACTACGGCTCTGAAGTCACCA3′，Primer 2:5′GAAGTGTGAGACTCTCGTGTAGAC3′。RTPCR产物长度为200 bp。uPA RTPCR条件为：50 ℃反转录30 min，95 ℃预变性15 min；然后94 ℃变性1 min，62 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，30个循环；最后72 ℃延伸10 min。PAI1引物序列 Primer 1:5′TGCTGGTGAATGCCCTCTACT3′ ，Primer 2:5′CGGTCATTCCCAGGTTCTCTA3′。RTPCR产物长度398 bp。PAI1 RTPCR条件为：50 ℃反转录30 min，95 ℃预变性15 min；然后94 ℃变性1 min，60 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，32个循环；最后72 ℃延伸10 min。内对照看家基因GAPDH引物序列 Primer 1：5′ACTGCCACCCAGAAGACT3′，Primer 2:5′ GCTCAGTGTAGCCCAGGAT3′。RTPCR产物长度292 bp。GAPDH RTPCR条件为：50 ℃反转录30 min，95 ℃预变性15 min；然后94 ℃变性1 min，62 ℃退火1 min，72 ℃延伸1 min，27个循环；最后72 ℃延伸10 min。
　　1.2.3 RTPCR半定量分析 取3 μL PCR扩增产物，经20 g/L琼脂糖电泳后，置于凝胶成像分析仪下经Biocaptmw软件分析。分别将uPA、PAI1 mRNA与GAPDH PCR产物电泳条带扫描灰度值相比，其比值作为uPA及PAI1基因表达的数值并进行半定量分析。
　　1. 3 统计学处理
　　采用SPSS 11.0软件包进行统计分析，实验结果以±s表示，组间比较采用F检验。
　　2 结　　果
　　2.1 不同组织中uPA和PAI1 mRNA的表达
　　uPA mRNA在卵巢癌组织中的表达显著高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(F=184.51，q=22.63～26. 69，P&<0.05);uPA mRNA在卵巢良性上皮性肿瘤和正常卵巢组织中的表达无统计学差异（q=0.54，P&>0.05）。PAI1 mRNA在卵巢癌组织中的表达显著高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织(F=51.00，q=11.34～11.95， P&<0.05)；PAI1 mRNA在卵巢良性上皮性肿瘤和正常卵巢组织中的表达无统计学差异（q=0.19，P&>0.05）。见表1。
　　2.2 卵巢癌不同分化程度的组织中uPA和PAI1 mRNA的表达
　　在低、中、高3种不同分化程度的卵巢癌组织中uPA 及PAI1 mRNA的表达随分化程度降低而增加，差异有显著意义(F=110.62、38.43，q=3.10～6.86，P&<0.05)；其中以低分化卵巢癌组织中uPA 及PAI1 mRNA的表达最高，分化越好的卵巢癌组织中uPA及PAI1 mRNA表达越低。见表2。表1 uPA及PAI1 mRNA在3种不同卵巢组织中的表达表2 uPA及PAI1 mRNA在不同分化程度的卵巢癌组织中的表达
　　 3 讨　　论
　　自1976年ASTEDT报道肿瘤可能产生uPA以来，uPA系统在肿瘤浸润和转移过程中的作用日益受到人们的重视［3］。人类的uPA基因位于染色体10q24qter，长度为7 258 bp，由11个外显子和10个内含子组成，成熟的mRNA长度为2 400 bp。uPA是一种丝氨酸蛋白酶，它可以激活纤溶酶原转化成纤溶酶，进而降解细胞外基质，使组织结构改变、细胞移动，促进肿瘤浸润转移［4］。 在对胰腺癌、肾细胞癌等的研究中显示，uPA的水平与这些肿瘤复发率、转移率甚至病人病死率呈正相关［5，6］。 本研究结果显示，uPA mRNA在卵巢癌组织中的表达显著高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织，且在不同分化程度的卵巢癌组织中uPA mRNA的表达不同，低分化卵巢癌组织中uPA mRNA的表达最高，分化越好的卵巢癌组织中uPA mRNA表达越少。此结果表明卵巢癌uPA基因的转录水平上调，导致组织内uPA蛋白合成增加，浓度上升。提示uPA基因可能在促进卵巢癌癌细胞的基质浸润和转移过程中起了重要作用。这与KONECNY等［7］的研究结果相一致。
　　PAI1属于丝氨酸抑制因子家族，PAI1为长5 200 bp的糖蛋白，属于Serpin超家族成员。PAI1作为有效的特异性uPA抑制剂，参与形成uPAR: uPA/PAI复合物，调节uPA活性及uPAR细胞膜上的位置变化，维持胞外蛋白降解平衡。PAI1抑制活性阻止细胞外基质的过分降解，适当的细胞外基质及微血管基膜局部降解促进内皮细胞迁移、增殖，进而促进新生血管形成。ISOGAI等［8］研究显示，PAI1能够促进内皮细胞的迁移，是肿瘤新生血管形成的主要因素。
　　本文研究显示，PAI1 mRNA在卵巢癌组织中的表达水平显著高于卵巢良性上皮性肿瘤及正常卵巢组织，且在低、中、高不同分化程度的卵巢癌组织中PAI1 mRNA的表达不同，低分化卵巢癌组织中PAI1 mRNA的表达最高，分化越好的卵巢癌组织中PAI1 mRNA表达越少。这与TECIMER等［9］的研究结果一致。一些研究结果也证实，PAI1与uPA有协同作用，其高表达是恶性肿瘤预后不良的指标。浸润和转移是卵巢癌主要的生物学特征之一，也是卵巢癌病人治疗失败和死亡的主要原因。本研究表明，uPA及PAI1基因在卵巢癌中高表达并与病理分化程度密切相关。因此，对uPA及PAI1基因进行深入广泛的研究，可了解卵巢癌浸润和转移的具体机制，为卵巢癌的临床治疗提供理论依据。

参考文献

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