对4039例妇女HPV感染情况的调查与浅析

【摘要】目的　了解义乌地区妇女宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染的分布情况，确定本地区的优势型别。 方法　采用流式荧光杂交法对4039例妇女进行26种HPV基因型检测，分析宫颈病变中HPV亚型感染分布特点。 结果　在被调查的4039例妇女中HPV感染总阳性率为16.4%（661/4039），感染亚型从高到低依次为：16、52、58、33和18，感染率为：16亚型占18.9%；52亚型占16.8%；58亚型占12.5%；33亚型占7.8%；18亚型占6.7%。 结论　本地区HPV亚型感染分布以16、52、58、33型为主。
【关键词】　人乳头瘤病毒　宫颈癌
　　人乳头瘤病毒（human papillomavrius，HPV）是一种具有种属特异性的嗜上皮病毒，属双链闭环的小DNA病毒，大量流行病学研究已证实，HPV的感染与子宫颈癌的关联最为密切，高危型HPV持续感染是发生子宫颈癌的重要原因。HPV感染检测已成为筛查和预防宫颈癌的关键问题之一[1-3]。
　　1　资料和方法
　　1.1资料
　　1.1.1病例来源：2011年1月至6月在我院妇科门诊就诊以及体检中心进行常规体检的妇女4039例（年龄18-78岁）。对所研究病例以年龄段为分组依据，25岁及25岁以下为一组，61岁及61岁以上为一组，中间年龄每5年为一个年龄段既为一组，剔除二次复查数据。
　　1.1.2标本采集：采集生殖道拭子标本，取样时尽量避免取样不全而造成漏检，标本采集后立即送检。4℃保存不超过24h。
　　1.1.3仪器与试剂：流式荧光杂交法HPV核酸检测试剂盒(上海透景生命科技有限公司)，多功能流式分析仪Luminex 100(美国Luminex公司)。HC-2试剂盒(美国Digene公司)。基因杂交信号放大系统DML2000(美国Digene公司)。
　　1.2方法
　　1.2.1抽提DNA：按试剂盒说明进行。
　　1.2.2PCR扩增：扩增HPV DNA的引物是MY09／MYll的改进型，引物为生物素标记，扩增靶区为HPV LI区，产物长度约480bp。此外，还包括扩增人B-珠蛋白编码基因的引物，用于特异性扩增人p-珠蛋白DNA片段。加抽提后的DNA 50-100ng到主混合液(Master Mix，含dNTP、M92+、引物混合液、Taq酶、双蒸水)。扩增条件为95℃5min；以下为5个循环：95℃30s，58℃30s，72℃30s；再接35个循环：95℃30s，55℃30s，72℃30s；最后：72℃3min。
　　1.2.3杂交检测：将编码微球与DNA探针混合(探针浓度10umol／L，10ul微球原液)；向检测板的每孔中加入微球-探针杂交液22ul、PCR产物3ul；PCR仪中99℃变性5min，48℃30min使探针-扩增产物结合；向每孔中加入75ul链霉亲和素标记的藻红蛋白(SA-PE)，48℃孵育15min；Luminex多功能流式分析仪检测。
　　表1 4039例女性年龄分布与HPV感染检出率的关系
　　
　　注：各年龄组的阳性检出率用X2检验，X2=80.87 P&<0.01，查差异有统计学意义
　　表2 HPV高危亚型检出例数分布情况
　　 转贴于 　　2　结果
　　2.1从表1中可知，本研究共检测4039例样本，其中阳性病例661例，阳性检出率为16.4%，41-45岁年龄段的阳性百分比最高为16.3%，形成一个最高峰；而56-60岁阳性检出率最高，为36.8%，明显超过平均检出率，说明阳性检出率随着研究病例年龄段的增长，呈现出一种上升的趋势。从表1可以看出各年龄段HPV感染检出率差异有显著性，具有统计学意义。
　　2.2从表2中可知，本研究的4039例样本中HPV感染的阳性病例中，主要以16亚型为主，占18.9%，其次为52亚型，占16.8%，再次为58亚型，占12.5%
　　3　 讨论
　　宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，其发病率仅次于乳腺癌位居第二位[4]。HPV是一种诱发女性宫颈癌及生殖器病变的主要病源体。在超过95%的早期浸润和浸润性宫颈癌中，至少发现20种致癌HPV亚型。现已明确HPV感染是宫颈上皮瘤变和浸润性宫颈癌发生的重要原因。临床HPV检测对于发现宫颈癌高危患者早期防治有着重要意义。
　　流式荧光杂交法采用多重PCR技术对检测样品的核酸DNA进行扩增，并用包被有核酸探针的多种编码微球和扩增产物进行杂交，结果用流式点阵仪检测分析。多重PCR可有效扩增WHO确认的HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和66共13种高危亚型，此外还可以有效扩增其他6种高危亚型（HPV26、53、55、68、82、83）和7种低危亚型（HPV6、11、40、42、44、61、73）.
　　本文利用流式荧光杂交法对本院就诊的女性进行HPV感染亚型筛查，从表2 中可见16、52、58亚型明显为较其它亚型检出例数更高，该三种亚型检出例数占总亚型检出例数的 48.2%，可见义乌地区以16、52、58亚型感染为主.
　　本文各年龄段的阳性检出率在统计学上是有显著性差异的，提示HPV的阳性检出率和年龄有关系，从表1可见，41-45岁年龄段的阳性百分比最高为16.3%，形成一个最高峰。另外50岁以上的妇女检出率明显超过平均检出率，这说明在这年龄段的妇女因为知识层次和社会接触的关系，对宫颈癌的筛查和自我保健意识还是比较薄弱，而研究表明35岁以上女性持续感染高危型HPV，这部份女性是宫颈癌的高发人群[5]。子宫颈的癌前病变（CIN）到癌是一个相对较长时间的过程，即宫颈感染HPV → CIN →原位癌→早期浸润癌→浸润癌，研究显示要经历10年左右时间[6]。随着我国生活水平的提高，大家的保健意识也有加强。这些对于减少宫颈癌的发生、发展有积极的意义，高危型HPV感染在宫颈癌的发生及发展中起主要作用，由于，41-45岁年龄段的阳性百分比最高，而51岁以上妇女检出率明显超过平均检出率，因此应加强40岁以上妇女宫颈癌的普查力度，为进一步减少宫颈癌的发生做努力。
　　HPV感染有一定的地域性，感染亚型存在一定的地域差别。本地区在被调查的4039例妇女中HPV感染总阳性率为16.4%，优势型别依16.52.58.33和18。据资料显示，辽宁地区HPV阳性率47.28%，优势型别依次为别HPV16、58、52、33、53和31[7]；贵州省的部分地区(遵义、黔南、铜仁)HPV感染主要型别依次是HPV16、52、18、58[8]；重庆永川地区优势型别依次是HPV16、6、11、33、58[9].由此可见，我国地域宽广，人口众多，HPV亚型分布复杂，感染趋势有向多向性发展的方向，本次HPV感染所获得的资料可为本地区宫颈癌防治提供一组有效的数据，为今后HPV的防治提供依据。
参 考 文 献
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