SEROZYME系统测定血清FT3、FT4及其临床评价

【摘要】 目的 用SEROZYME系统检测血清FT3、FT4并进行临床与实验室考核。方法 将本系统与放射免疫法(RIA)进行对比研究。 结果 健康人(n=68)血清FT3、FT4水平( +SD)分别为4.1±1.1pmol/L、14.1±3.2pmoL/L。甲减组FT4水平下降(P<0.01)；FT3水平与正常对照组无显著差异(P>0.05)；初诊甲亢组 FT3、FT4(P均<0.01)水平升高；糖尿病组FT3水平下降(0.05>P>0.01)，FT4水平与正常对照组无显著差异(P>0.05)；其它各疾病组两项指标与正常对照组均无显著差异(P均>0.05)；与RIA对比检测血清FT3、FT4两法符合率分别达81.5％、74.8％；重复性：批内与批间变异系数(CV)FT3分别为2.8％～5.6％、6.8％～9.0％，FT4分别为1.2％～3.4％、4.6％～7.0％；最少检量：FT3为0.9pmol／L，FT4为0.1pmol/L；真实性及诊断价值：FT3与FT4联合对甲亢、甲减诊断的灵敏度分别为92.2％、90.6％。特异性分别为97.1％、97.1％，总有效率均为95％；阳性预示值分别为95.9％、91.7％；阴性预示值分别为97.1％、95.7％。结论 本检测系统对甲状腺功能的诊断灵敏、特异、可靠，与RIA技术相当，或有更多优点。
【关键词】 磁分离酶联免疫测定法MAIA 游离3，5，3’-三碘甲状腺氨酸(FT3) 游离四碘甲状腺氨酸(FT4)。
　　血清游离3，5，3’-三碘甲状腺氨酸(FT3)、游离四碘甲状腺氨酸(FT4)是甲状腺疾病诊断与疗效评定的重要指标。在国内，一般采用放射免疫法(RIA)检测，其优点是敏感可靠，缺点为试剂受同位素半衰期的限制，有效期短，放射性辐射对人体有伤害，在试剂的管理和处理上存在诸多的麻烦。磁分离酶联免疫测定系统(SEROZYME)检测血清FT3、FT4，是一种超微量的非放射性物质标记的免疫化学定量分析技术，我们对其进行了临床考核，现将结果报告如下。
　　1 对象与方法
　　1.1研究对象
　　本院门诊及住院病人163例(其中临床确诊甲减32例、初诊甲亢51例、随诊甲亢26例、治愈甲亢6例、甲状腺瘤14例、甲状腺肿5例、心脑血管疾病22例、糖尿病7例)，年龄14～75岁，男性61例，女性102例；正常对照组68例，年龄15～78岁，男性35例，女性33例。
　　1.2方法
　　(1)血样本采集：研究对象静脉采血，分离血清，-20℃贮存，一周内完成检测。
　　(2)测定方法：
　　1)SEROZYME系统：由FT3、FT4试剂及SEROZYME-I型磁酶免内分泌定量测定仪组成；北京倍爱康生物技术有限公司提供。采用荧光素标记抗FT3、FT4单克隆抗体，用碱性磷酸酶标记FT3、FT4，并与样本中的FT3、FT4竞争结合荧光素标记的抗FT3、FT4克隆抗体，继而用抗荧光素抗体偶联的磁分离剂与荧光素标单克隆抗体结合，经洗涤后，加单磷酸酚酞底物作用，最后加NaOH终止酶反应，用SEROZYME-I型磁酶免内分泌定量测定仪同时测定三波长(492nm／550nm／630nm)下的吸光度，仪器内微机软件自动拟合标准曲线，计算并打印出样本的测定结果。
　　2)对照方法：FT3、FT4放免药盒，由中科院上海核技术开发公司提供，按说明书操作，测定仪器为中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂生产的SN-682放射免疫γ计数器。正常参考值：FT3为2.8～11.2pmol／L，FT4为9.5～27.4pmol/L。
　　2 结果
　　2.1病人及正常人血清(MAIA)法FT3及FT4结果
　　(1)健康人血清FT3及FT4水平：68例健康人血清FT3水平算术平均值为4.1pmoL/L，标准差为1.1pmol/L，中值为4.1 pmol/L，血清FT4水平算术平均值为14.1pmoI/L，标准差为3.2 pmol/L，中值为13.4 pmol/L。
　　注：与正常对照组比较，“**”，差异非常显著，P<0.01；“*”，差异显著，0.01<P<0.05。
　　(2)病人血清FT3及FT4水平：与正常对照组比较，初诊甲亢组FT3及FT4水平升高，差异非常显著(t分别为9.0 654、4.7 191、P<0.01)，糖尿病组FT3水平下降，差异显著(t=2.7 357，0.0l<P＜0．05)：甲减组FT4水平降低，差异非常显著(t=5.9 96，P<0.01)；其余均无显著差异。 　　 (3)正常参考值：本组测定68例正常人，FT3、FT4正常参考值(x-±2SD)范围分别为1.9～6.3pmoVL、7.9～20.5pmol／L与SERONO公司的结果(FT3：1.86～6.43pmol／L，FT4：9.3～22.1pmol／L)基本一致。
　　2.2与放射免疫法(RIA)结果的比较
　　对151份病人血清标本同时用MAIA及RIA两种方法检测血清FT3、FT4，两法符合率分别为81.5％、74.8％。结果不一致的样本，其值多数处在正常值上下限交界处；个别样本的两法得值差距甚大，可能系方法本身或其它原因；1份脂质血样(甲减患者之样本)FT3、FT4用MAIA法分别为2．4、1.6pmol／L，而RIA法却分别高达42、118.8pmol／L，明显地脂质干扰了 RIA法测定，而MAIA法未受影响。
　　2.3 MAIA法FT3、FT4试剂在甲亢和甲减诊断中的可靠性、真实性及临床价值
　　(I)重复性：对药盒所附的质控血清进行了重复性测定，FT3变异系数(CV)：批内为2.8％～5.6％，批间为6.8％～9.0％；FT4变异系数(CV)，批内为1.2％～3.4％，批间为4.6％～7.0％。
　　(2)最少检测量(灵敏度)：以0标准光密度均值(x-)减去2个标准差(2SD)计，FT3为0.9pmol/L，FT4为0.1pmoL/L。
　　(3)真实性及诊断价值。
　　3 讨论
　　对SEROZYME系统检测血清飓、FT3、FT4，并进行临床与实验室考核。结果表明其对甲亢、甲减的诊断有较高的灵敏度与特异性；与RIA对比检测结果表明，两法有较好的一致性。MAIA法FT3、FT4试剂灵敏度可分别达0.9pmolfL、0.1pmol／L，与放射免疫法相当。
　　本检测系统，采用了FT3、FT4碱性磷酸酶标记物及抗FT3、FT4单克隆抗体的荧光素标记物，特别是单克隆抗体的引入，极大地提高了测定的特异性；磁性分离技术的应用，简化了操作，缩短了流程，省却了低温离心等仪器设备；单磷酸酚酞作为酶底物，呈色稳定，对人体无害、无环境污染，无公害，MAIA法FT3、FT4试剂有效期长，可达4～6个月，适合标本量不大的实验室，特别是基层医院。SEROZYME-I型磁酶联免疫定量测定仪设置人机对话程序，具有在三波长下(492nm/550nm/630nm)同时测定样本吸光度值，可自动排除比色皿的干扰，进行峰值与非峰值波长自动切换组合检测、拓宽量程、标准曲线的拟合及检样的数据处理和结果的打印等功能，仪器性能较稳定，故SEROZYME系统是一种理想的、可替代RIA的、用于激素等微量物质定量和定性分析的免疫化学技术。
参 考 文 献
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