作者：陈行愉，韩丽萍，刘志刚，黄雪峰
【摘要】 目的 建立一种快速测定苯麻滴鼻剂中两种组分含量的方法。方法 采用毛细管区带电泳分离模式，运行缓冲液为20 mmol·L-1磷酸缓冲液(pH 5.0)，检测波长204 nm，内标物为甲氧苄啶。结果 盐酸苯海拉明在2.5～62.5 μｇ·mL-1，盐酸麻黄碱在10～250 μｇ·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9)，在75%～125%处方标示量范围内，回收率符合要求。结论 毛细管电泳法可用于同时测定苯麻滴鼻液中盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱含量，方法准确可靠，操作简便易行。
【关键词】 毛细管电泳法；苯麻滴鼻剂;盐酸苯海拉明；盐酸麻黄碱
Abstract:Objective To establish a capillary zone electrophoresis for the determination of diphenhydramine hydrochloride and ephedrine hydrochloride in Benma nasal drops. Methods The phosphate buffer solution was 20 mmol·L-1(pH=5.0)， the detection wavelength was 204 nm. Results The linear ranges of diphenhydramine hydrochloride and ephedrine hydrochloride were 2.5-62.5 μｇ·mL-1 and 10～250 μｇ·mL-1， respectively(r=0.999 9). Conclusion The method was accurate and simple， which can be used for the determination of diphenhydramine hydrochloride and ephedrine hydrochloride in Benma nasal drops.
Key words:capillary zone electrophoresis; diphenhydramine hydrochloride; ephedrine hydrochloride
苯麻滴鼻液含盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱，是治疗过敏性鼻炎常用制剂。《中国人民解放军医疗机构制剂规范》2002年版中收载了两种测定方法［1］，一种是酸碱滴定法测定盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱总量，一种是褶合光谱法。另外还有高效液相法［2］、导数分光光度法［3］和高效毛细管电泳［4］同时测定两种组分的文献报道。酸碱滴定法不能实现分别定量，褶合光谱法和导数分光光度法属于计算分光光度法，药典中均未收载；而高效毛细管电泳法所使用的涂层毛细管价格昂贵，使用范围受限。本实验用普通毛细管高效毛细管区带电泳，以甲氧苄啶为内标，建立了同时测定盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱含量的方法，10 min内即可实现2种组分的有效分离。
1 仪器与试药
P/ACETM MDQ型高效毛细管电泳仪、二级管阵列紫外检测器（PDA）、化学工作站、熔融石英毛细管(64.5 cm×75 μm) (美国贝克曼库尔特有限公司)。盐酸苯海拉明、盐酸麻黄碱及甲氧苄啶对照品(中国药品生物制品检定所，批号分别为00669705、171241200303、100031200304)，所用实验试剂均为国产分析纯，水为二次重蒸馏水，盐酸苯海拉明麻黄碱滴鼻液(自制，批号分别为041228、050328、050629，标示量分别为2.5 mg·mL-1 、10 mg·mL-1)。
2 方法与结果
2.1 电泳操作条件
毛细管总长度60 cm，75 μm内径，运行缓冲液20 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH5.0)；柱温25 ℃；分离电压18 kV，正极到负极；压力进样，进样压力为3.44 kPa，持续10 s；检测波长为204 nm；样品溶液和运行缓冲液均经过0.45 μｍ微孔滤膜滤过。每次进样前，用分离缓冲液冲洗2 min，分离时使用新鲜缓冲液，在优选的电泳分离条件下，典型的电泳图谱见图1、图2。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取盐酸麻黄碱和盐酸苯海拉明对照品适量，加热水溶解，制成每毫升分别含盐酸麻黄碱0.5 mg·mL-1、盐酸苯海拉明0.125 mg·mL-1的对照品溶液。
2.3 内标溶液的制备
称取甲氧苄啶对照品约5 mg，置50 mL量瓶中，加少量甲醇溶解后，加水稀释至刻度。
2.4 供试品溶液的制备
精密吸取盐酸苯海拉明麻黄碱滴鼻液1 mL，置10 mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置另一10 mL量瓶中，加入甲氧苄啶内标溶液（0.1 mg·mL-1）1 mL，用重蒸水稀释至刻度，摇匀。
2.5 线性关系考察
分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液适量，置10 mL量瓶中，精密加入0.1 mg·mL-1甲氧苄啶溶液1 mL，加水稀释至刻度，摇匀，制成每毫升约含盐酸麻黄碱10～250 μｇ和盐酸苯海拉明2.5～62.5 μｇ的混合对照品系列溶液。按“2.1”项下条件进行分析。以对照品与内标物的峰面积（A）比为纵坐标，相应对照品质量浓度（ρ）为横坐标，进行线性回归。得到盐酸苯海拉明回归方程为：A=21.296ρ- 0.531（n=6），r=0.999 9；盐酸麻黄碱线性回归方程为：A=60.132ρ-6.5293（n=6），r=0.999 9。盐酸苯海拉明在2.5～62.5 μｇ·mL-1，盐酸麻黄碱在10～250 μｇ·mL-1质量浓度范围内线性关系良好。
2.6 精密度考察
取按100%处方量制得的标准样品，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，连续测定6次，计算麻黄碱、苯海拉明及甲氧苄啶3组分峰面积及迁移时间的RSD值。结果3组分峰面积的RSD 值分别为0.65%、0.95%、0.77%；迁移时间RSD值分别为0.28%、0.29%和0.31 %，表明仪器精密度良好。
2.7 稳定性考察
取同一供试品溶液分别在0、2、4、6、8 h进样，记录峰面积及迁移时间。结果盐酸麻黄碱、盐酸苯海拉明及甲氧苄啶迁移时间的RSD分别为0.25%、0.27%和0.32%，峰面积的RSD分别为0.38%、0.26%和0.31%，说明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.8 重复性考察
取同一批号样品，按“2.4”项下方法制备6份。结果盐酸麻黄峰面积RSD为1.80%，迁移时间RSD为0.31%；盐酸苯海拉明峰面积RSD为1.27%，迁移时间RSD为0.38%。说明该分析方法重复性良好。
2．9 回收率试验
按处方量的75％、100％、125％，精密称取已知含量的盐酸苯海拉明及盐酸麻黄碱原料，配制成不同浓度的标准样品。按“2.1”项下操作，定量分析，计算回收率，结果见表1。表1 盐酸苯海拉明与盐酸麻黄碱回收率测定结果（略）
2.10 样品测定
按“2.4”项下方法制备供试品溶液，另精密吸取含盐酸麻黄碱（约1 mg·mL-1)和盐酸苯海拉明(约0.25 mg·mL-1)的混合对照品溶液1 mL，置10 mL盐酸苯海拉明ρ/（mg·mL-1）RSD/%盐酸麻黄碱ρ/（mg·mL-1）RSD/%0412282.54±0.04 1.7810.01±0.12 1.250503282.29±0.04 1.659.89±0.060.590506292.45±0.04 1.559.90±0.050.52
3 讨 论
3．1 内标物的选择
本实验对甲氧苯胺及甲氧苄啶作为内标物进行了考察。在该色谱条件下，甲氧苄啶能与各组分充分分离，并具有与被分析组分基本一致的理化性质，因此选择甲氧苄啶作为内标物。在204 nm波长下，各组分都能得到较好的色谱峰。
3．2 pH值的考察
在毛细管电泳技术中，缓冲液pH是影响分离的重要因素。不同的ｐＨ值缓冲液一定程度上改变了分离溶质的表现电荷数，使之形成不同的质荷比，从而产生两者差速电迁移结果。本实验考察了pH对盐酸苯海拉明、盐酸麻黄碱及内标甲氧苄啶分离效果的影响。结果表明，在低pH时分离度较大，但峰型较差，有拖尾现象；pH较高时峰型较好，但分离度变差甚至不能分离；在pH=5.0时，可获得较满意的分离度，且峰型较好。
3．3 缓冲液的处理
由于pH5.0时电离度较大，缓冲液的离子强度改变，容易造成迁移时间和峰面积重复性差。通过及时更换缓冲液及将冲洗和分离用缓冲液分别装在不同的样品瓶中，保证盐桥两边的缓冲液离子强度相等，即可达到良好的精密度。
参考文献
［1］ 总后卫生部.中国人民解放军医疗单位制剂规范:2002年版［M］. 北京：人民军医出版社，2002:264-265.
［2］ 车洪勇，杨元玉，王瑞媛.HPLC法测定百喘朋片中的盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱的含量［J］.药物分析杂志，2004，24（1）：91-92.
［3］ 廖晓玲，吕本强，曹仲文，等.苯麻滴鼻液含量测定方法的改进［J］.解放军药学学报，2003，19（3）：237-238.
［4］ 范国荣，胡晋红，林梅，等.盐酸苯海拉明和盐酸麻黄碱的毛细管电泳分离分析［J］.中国医院药学杂志，2000，20（9）：522-524.