乙型肝炎患者血清IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1检测的临床意义

　　 作者：朱凤群，霍康，陈天艳，李春姬，王亚文，赵英仁

【摘要】 　　目的 探讨血清IL12、IL18水平在乙型肝炎发生发展中的意义及与肝纤维化的关系。方法 采用双抗体夹心ELISA法检测血清IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1水平。结果 患者血清IL12﹑IL18﹑TGFβ1及TIMP1水平与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。随慢性肝炎中度→慢性肝炎重度→肝硬化临床类型的逐渐加重，血清IL18、TGFβ1、TIMP1水平呈增高趋势，差别具有统计学意义(P<0.05)。TGFβ1、TIMP1与PCⅢ、LN、IVC相比，相关系数r分别为0.986、0.998、0.925和0.921、0.987、0.814。结论 乙型肝炎患者血清IL12、IL18、TGTB1及TIMP1水平和对照组相比有显著变化，且与病情变化有关。TGFβ1、TIMP1与PCⅢ、LN、IVC有良好的相关性。

【关键词】 乙型肝炎；肝纤维化；白细胞介素

　　ABSTACT: Objective To investigate the significance of L12 and IL18 in serum of the progression of hepatitis B， the relation of the levels of TGFβ1， and TIMP1 with liver cirrhosis， and explore the relation between the levels of these four cytokines. Methods The levels of IL12， IL 18， TGFβ1 and TIMP1 in serum were detected by ELISA. Results The levels of IL12， IL18， TGFβ1 and TIMP1 differed significantly between hepatitis groups and the corresponding control groups (P<0.05). The level of IL18， TIMP1 and TGFβ1 increased obviously with the progression of the disease (P<0.05)， from chronic hepatitis (moderate) to chonic hepatitis (severe) to cirrhosis (clinical type). The correlational coefficient of TGFβ1 with PCⅢ， LN and IVC was 0.986， 0.998 and 0.925， respectively; that of TIMP1 with PCⅢ， LN and IVC was 0.921， 0.987 and 0.814. Conclusion The levels of IL12， IL 18， TGFβ1 and TIMP1 in serum have significant differences between hepatitis patients and the controls， and they are related with progression of the disease. TGFβ1 and TIMP1 have significant correlation with PCⅢ， LN， and IVC.

　　KEY WORDS: hepatitis B; hepatic fibrosis; interleukin

　　免疫细胞及其分泌的细胞因子积极参与了病毒性肝炎的发生发展过程。白细胞介素12(IL12)、白细胞介素18(IL18)直接或间接的作用于肝脏，是病毒性肝炎发病的重要炎性细胞因子。转化生长因子B1(TGFβ1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)在慢性肝炎肝细胞损伤的中作用也不容忽视。层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(PCⅢ)、Ⅳ型胶原蛋白(IVC)是反映肝纤维化的一组血清学指标。炎症及肝细胞的损伤是肝纤维化始动因素，慢性肝炎患者血清IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1水平变化和肝纤维化的关系引起人们的关注。本研究通过检测血清IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1水平，探讨其与不同临床类型乙肝的关系及与肝纤维化指标层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(PCⅢ)、Ⅳ型胶原蛋白(IVC)的相关性。

　　1 材料与方法

　　1.1 标本来源

　　69例血清标本均采自本院2005年6月至2005年11月传染科住院患者，慢性乙型肝炎中度22例、重度16例，乙肝肝硬化21例，肝癌10例；男性56例，女性13例，年龄19-69岁，平均年龄45.8岁。诊断标准符合2000年修订的《病毒性肝炎防治方案》，所有患者均排除甲、丙、丁、戊型肝炎病毒混和感染及其他原因引起的肝炎。既往未曾进行抗病毒治疗。对照组28例来自于门诊健康体检者，不合并其他急慢性疾患。

　　1.2 检测方法

　　抽取早晨空腹静脉血5mL，分离血清，低温(-25℃)冻存待检。IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1检测采用双抗体夹心ELISA法，试剂盒由上海船夫生物有限公司提供。采用竞争性放射免疫分析法检测层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原蛋白(PCⅢ)、Ⅳ型胶原蛋白(IVC)。LN 、PCⅢ指标试剂由北京北方生物技术研究所提供，IVC指标试剂由上海海研医学生物技术有限公司提供。DG3022A型酶标仪为国营华东电子管厂生产。具体步骤均严格按照说明书操作。1.3 统计学方法 应用SPSS13.0统计学分析，两组间比较采用成组设计的两样本均数比较的t检验，多组数据间的比较采用方差分析，比较两组间相关性用直线相关分析。

　　2 结 果

　　2.1 各组血清IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1水平的比较
　　各临床类型乙型肝炎患者血清IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1水平与相应的对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。随慢性肝炎中度→慢性肝炎重度→肝硬化临床类型的逐渐发展，血清IL12的水平逐渐降低，且差别有统计学意义(P<0.05)；血清IL18、TGFβ1、TIMP1水平逐渐增高，差别也具有统计学意义(P<0.05，表1)。

　　2.2 TGFβ1、TIMP1与PCⅢ、N、IVC的相关性

　　分别比较22例慢性乙肝中度、16例慢性乙肝重度、21例乙肝肝硬化患者血清TGFβ1、TIMP1水平与肝纤维化三项指标PCⅢ、LN、IVC之间的关系(表2、表3)，发现TGFβ1、TIMP1分别与PCⅢ、LN、IVC具有良好的相关性，相关系数r分别为0.986、0.998、0.925。和0.921、0.987、0.814。表1 不同临床类型乙型肝炎患者血清IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1水平的测定（略）表2 乙肝患者血清水平TGFβ1与PCⅢ、LN、IVC的相关性检测（略）表3 TIMP1与PCⅢ、 LN 、IVC的相关性检测（略）

　　3 讨 论

　　在病毒性肝炎的发病机制中，众多的细胞因子参与了其发病过程。IL18主要由活化的巨噬细胞和肝脏枯否氏细胞产生，参与宿主的免疫应答，并与肝脏的炎症程度相关[24]。IL12作为巨噬细胞分泌的炎性因子，它不仅可以独立作用于NK细胞和细胞毒性T细胞(CTL)，介导细胞毒性肝脏炎性反应，而且具有增强IL18炎性作用的功能，说明IL12可以单独或协同IL18参与病毒性肝炎的炎性损伤过程。目前，关于IL12检测的报道结果不一，可能跟病毒性肝炎患者复杂的免疫反应有关。

　　在慢性肝炎或肝纤维化形成过程中，肝脏间质细胞(枯否氏细胞、肝星状细胞、上皮细胞)TGFβ1表达增加，且实质细胞对其表达也被启动。肝星状细胞(HSC)被大量激活，分泌TGFβ1增加；可促进肝间质细胞合成多种胶原蛋白(Ⅲ、Ⅳ等胶原蛋白)、非胶原蛋白(纤维连接素、层黏连蛋白等)和蛋白多糖(透明质酸等)等多种肝细胞外基质(ECM)的各种成分，并抑制胶原酶及基质金属蛋白酶使胶原降解减少，从而导致肝硬化。TGFβ1主要由活化的肝星状细胞和枯否氏细胞产生。现已证明，TGFβ1在肝细胞坏死后对肝细胞的再生起抑制作用，病情愈重TGFβ1水平愈高[8]。

　　肝硬化的早期阶段肝纤维化的主要病理变化为细胞外基质(ECM)在肝脏中过多沉积，基质金属蛋白酶(MMPs)在降解纤维化肝脏过多ECM的过程中起主要作用，其中MMP1在降解纤维化肝脏ECM的主要成份Ⅰ、Ⅲ型胶原的过程中起重要作用，而对MMP1活性起主要抑制作用的是TIMP1，TIMP1是TIMPs的家族中的典型代表，由巨噬细胞和结缔组织产生，以可溶性小分子量多肽的形式分泌，广泛存在于组织和体液中，其可与活化的MMPs以非共价键结合抑制MMPs对ECM的降解，也可与酶原结合阻止其活化，通过抑制MMPs的活性而阻挡ECM的降解，从而引起细胞外基质的积聚。在肝纤维化过程中TIMP1通过MMPs(主要是MMP1)活性的抑制、Ⅰ、Ⅲ型胶原等ECM的降解，从而导致ECM在肝脏内的过度沉积，促进了肝纤维化的形成和发展。目前，发现在病损肝脏中TIMP1出现的时间较早，幅度较大 [56]。文献报告TIMP1随肝纤维化病程进展表达增强，肝硬化阶段达到高峰[7]。我们的研究显示IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1在慢性肝炎患者血清中水平是升高的，且和病情严重程度相关。随着临床类型的不断加重，TGFβ1、TIMP1水平明显增高，两者与PCⅢ、LN、IVC呈现明显相关，说明两者参与了乙肝肝纤维化的发生发展过程，具有加重肝损伤、促进纤维化作用。IL12、IL18在病毒性肝炎中具有保护和损伤的双重作用，与病毒性肝炎病变活动呈密切相关。我们认为检测IL12、IL18、TGFβ1、TIMP1在判断病毒性肝炎炎症损伤有一定的临床价值。

参考文献

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