作者：武海军 徐继辉 李月玲 刘和莉 杨玉梅
【摘要】 目的：观察二氧化碳（CO2）超临界提取的丹皮酚的抗炎作用。方法：用醋酸导致小鼠腹腔毛细血管通透性增加；用角叉菜胶导致大鼠足跖肿胀。结果：丹皮酚50.0、25.0、12.5 mg/kg灌胃给药，可明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性；丹皮酚32.0、16.0、8.0mg/kg灌胃给药，能显著抑制角叉菜胶所引起的大鼠足肿胀。结论：经CO2超临界提取的丹皮酚具有明显的抗炎作用。
【关键词】 丹皮酚；二氧化碳；超临界提取；抗炎
Abstrct Objective:To observe the anti-inflammatory effects of paeonol obtained through supercritical CO2 fluid extraction. Methods: Anti-inflammatory effect of paeonol was observed by examining the permeability increase of mouse abdominal capillary induced by acetic acid and carrageenin-induced paw edema. Results: Gastric perfusion of paeonol at the dose of 50.0mg/kg，25.0mg/kg and 12.5mg/kg could markedly inhibit acetic acid-triggered increase of abdominal capillary permeability； Gastric perfusion of paeonol at the dose of 32.0mg/kg，16.0mg/kg and 8.0mg/kg could significantly inhibit paw edema induced by carrageenin. Conclusion: Paeonol obtained through supercritical CO2 fluid extraction definitely exerts anti-inflammatory effects.
Key words Paeonol； Supercritical CO2；Fluid extraction； Anti- inflammatory
丹皮酚(Paeonal)是牡丹皮的主要活性成分，具有解热、镇痛、抗炎、降压、抗过敏、改善血液流变性等多种功效[1-3]。传统提取丹皮酚的方法有水蒸气蒸馏法、乙醇提取法和丙酮提取法[4]。而经CO2超临界萃取法提取的丹皮酚是否保持了牡丹皮提取物原有的药理活性尚未知。本文拟观察经CO2超临界萃取法提取的丹皮酚的抗炎作用。
1 材料与方法
1.1 药物 丹皮酚，经CO2超临界萃取法提取获得，每克丹皮酚相当于丹皮生药45.5g，批号20000413，由包头中药厂提供。临用时称取一定量丹皮酚充分研磨后，加入聚乙二醇400（5%）和吐温80（3～4滴/100mL）混匀，再加1%羧甲基纤维素钠配成所需浓度的混悬液。
1.2 药品与试剂 阿斯匹林肠溶片由天津中美史克制药厂有限公司生产（批号8903020）；冰醋酸（分析纯）由北京化工厂提供；尹文思兰由上海化学试剂采购供应站提供；角叉菜胶由辽宁省药物研究所提供；生物染色剂结晶紫由北京化工厂提供。
1.3 动物 昆明种小鼠和Wistar大鼠，均由内蒙古大学实验动物研究中心提供，合格证号&<京动字&>8806M35。
1.4 方法
1.4.1 丹皮酚对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 小鼠50只，雌雄各半，体重18～22g，随机分为5组，每组10只。第1组为空白对照组，给予溶剂；第2组为阳性对照组，给予阿斯匹林400.0mg/kg；第3～5组为受试药高、中、低剂量组，分别给予丹皮酚50.0mg/kg、25.0mg/kg和12.5mg/kg。各组按0.2mL/10g灌胃给药，每日1次，连续3天。在末次给药后40分钟，尾静脉注射1%伊文思兰0.1mL/10g，随即腹腔注射0.8%醋酸每只0.2mL，20分钟后脱颈椎处死，剪开腹部皮肤，用10mL生理盐水冲洗腹腔数次，收集冲洗液并定容至8mL，离心(3000rpm×15分钟)后取上清液用721B型分光光度计在590nm处测定样品OD值[5]。
1.4.2 丹皮酚对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响 雄性大鼠50只，体重180±14g，随机分为5组。第1组为空白对照组，给予溶剂；第2组为阳性对照组，给予阿斯匹林300.0mg/kg；第3～5组为受试药高、中、低剂量组，分别给予丹皮酚32.0mg/kg、16.0mg/kg、8.0mg/kg。各组大鼠均以2mL/100g的容量灌胃给药，每日1次，连续3天。在末次给药后1小时，于大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶每只0.1mL，致炎后1、2、4、6小时分别测定足跖容积，计算出肿胀值（致炎后容积与致炎前容积之差）[6]。
1.5 统计学方法 结果以均值±标准差（x±s）表示，t检验，P&<0.05认为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 丹皮酚对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性的影响 OD值越大，毛细血管通透性越大。表1结果表明，与溶剂对照组比较，阿斯匹林组和丹皮酚各剂量组的OD值降低，即丹皮酚可明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性。
表1 丹皮酚对小鼠腹腔毛细管通透性的影响（略）
*与对照组比较，P&<0.05；**与对照组比较，P&<0.01
2.2 丹皮酚对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响 表2结果表明，各剂量组的丹皮酚均能显著抑制角叉菜胶所引起的大鼠足肿胀，作用1小时即非常明显，持续至4小时。
表2 丹皮酚对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀的影响（略）
与对照组比较，行t检验 *P&<0.05，**P&<0.01
3 讨论
丹皮酚为脂溶性物质，极性较低，提取丹皮酚的传统方法有水蒸气蒸馏法、乙醇提取法和丙酮提取法，但含量和得率均不理想[4]。CO2超临界萃取法是近年应用较多的提取植物药有效成分的方法，主用于提取亲脂性强的低极性分子。实验证实，利用超临界萃取的丹皮酚色泽浅，含量高，香气浓，质量稳定[7]。本实验结果显示，丹皮酚可明显降低小鼠腹腔毛细血管通透性，显著抑制角叉菜胶所引起的大鼠足肿胀，呈现出较强的抗炎作用。实验结果表明，经CO2超临界萃取法提取的丹皮酚保持了牡丹皮提取物原有的药理活性，具有明显的抗炎作用。CO2超临界萃取工艺简便高效，本实验为丹皮酚实现CO2超临界萃取产业化生产提供了实验依据。
参考文献
[1] 李爱群.牡丹皮的药理研究[J].中草药，1989，19(6):36-38.
[2] 章灵华，肖境根，黄艺，等.丹皮酚的药理与临床研究进展[J].中国西医结合">中西医结合杂志，1996，16(3):187-190.
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[4] 尹永宇.丹皮酚提取工艺的研究[J].中成药，1995，17（9）：2-4.
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[7] 林英光，姚煜东.牡丹皮超临界萃取及其萃取物的应用研究[J].日用化学化工，2002，32(5):24-26.