苯扎贝特酯治疗大鼠非酒精性脂肪肝实验研究

【摘要】 目的 观察苯扎贝特酯对非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响。方法 高脂乳液制备SD大鼠非酒精性脂肪肝模型，随机分为模型对照组、苯扎贝特酯组和易善复组，治疗8周后行肝组织生化和病理学检测。结果 苯扎贝特酯能明显降低非酒精性脂肪肝大鼠模型肝脂（TG）的水平，改善脂肪变性。结论 苯扎贝特酯对非酒精性脂肪肝大鼠有较好的治疗作用。

【关键词】 苯扎贝特酯：非酒精性脂肪肝：肝脏脂质

　　【Abstract】 Objective To investigate the effect of Bezafibrate ester on nonalcoholic fatty liver disease（NAFLD） in rats．Methods NAFLD SD rat model was established by high fat diet，then pided into three groups at random：Model control group，Bezafibrate ester group and Essentiale N group．Biochemistry of liver tissue and liver specimens were detected respectively after 8 weeks' treatment．Results Bezafibrate ester obviously discreased fatty degeneration，reduce hepaticlipid （TG） on NAFLD rat model.Conclusion Bezafibrate ester has a better therapeutical effect on NAFLD rat model.

　　【Key words】 Bezafibrate ester；nonalcoholic fatty liver disease；hepatic lipid

　　苯扎贝特酯属于第二代贝特酸类衍生物，可以降低血清甘油三酯，胆固醇和低密度脂蛋白，升高高密度脂蛋白，对酒精性脂肪肝及非酒精性脂肪肝也有一定的治疗作用［1］。但也有相关报道该类降脂药物治疗后可相应加重肝的负担，故我们在苯扎贝特酯的化学结构上进行了一定的改造，重在增效和减毒，并研制出一种新的化合物，本次实验是对该新化合物治疗大鼠脂肪肝的药效研究进行初步的探讨。

　　1 试验材料

　　1.1 受试药物及试剂 苯扎贝特酯原料药，批号：081223，由成都地奥制药集团有限公司提供，纯度&>98%，根据前期的体外筛选试验，大鼠剂量设置为13.5mg/kg。

　　阳性药：易善复（多烯磷脂酰胆碱胶囊），228mg/粒，2粒/次，3次/d，24粒/盒。塞诺菲安万特（北京）制药有限公司，批号：D8139，国药准字：h30059010。实验时先用适量吐温研磨，再用0.5%的羧甲基纤维素钠（CMC）按设计浓度配制。

　　胆固醇（分析纯级），成都科龙化工试剂厂，批号:20071229；吐温-80（化学纯），成都科龙化工试剂厂，批号:20050402；胆酸钠（Sodium Taurochlate），上海Solarbio，批号:20060826；丙硫氧嘧啶片，50mg/片×100片/瓶，上海复星朝晖药业有限公司，批号:071105，国药准字H31021082；1，2丙二醇（分析纯），天津市大茂化学试剂厂，批号:20051128；羧甲基纤维素钠，上海三浦化工有限公司，批号:20010911。

　　1.2 实验分组及剂量设计 剂量分组见表1。表1大鼠脂肪肝试验剂量与分组

　　1.3 实验动物及场地 SD大鼠，雌雄各半，体质量230～250g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供；实验场地：成都地奥制药集团有限公司新药部药理实验室。

　　1.4 主要仪器 LD2-5医用离心机，北京医用离心机厂；SHA-C恒温振荡器，常州国化电器有限公司；TMS-1024i全自动生化分析仪，日本国东京医疗公司；BP221型电子天平，SARTORIOU。

　　1.5 统计学方法 用SPSS11.5统计软件进行统计分析。以（x±s）表示结果的数据用单因数方差分析进行组间比较；肝病理组间差异的显著性检验运用非参数检验分析方法；α=0.05。

　　2 实验方法及结果

　　2.1 实验方法 取SD大鼠，体重230～250g，64只，雌雄各半，随机分为4组，每组动物16只。将大鼠适应性饲养3天后，每天上午各组大鼠分别按表1设计剂量给药，空白组给予相应的CMC混悬液；下午除空白组外，其余各组大鼠分别灌胃给予高脂乳液（20%猪油、8%胆固醇、1.2%胆酸钠和0.6%丙硫氧嘧啶）［2］1ml/l00g。于第4周后末次给药后禁食16h（不禁水），眼眶取血，离心并分离血清，动态测定给药4周后的血清生化指标。

　　于第8周后末次给药后禁食16h（不禁水），称取大鼠体重，股动脉取血，离心并分离血清，-30℃低温保存，待测血清中的生化指标；另摘取肝脏并称重，观察大体外观后，每只大鼠在相同部位切下2g肝组织置于预冷的生理盐水中制成1O%肝匀浆，4℃静置48h后，10000r／min，离心20min，取上清液，用全自动生化仪测定肝组织内甘油三酯的含量；另取肝左叶1块放于10%中性福尔马林溶液，待作肝组织病理学检查（固定后，石蜡包埋，切片作HE染色）。

　　2.2 实验结果

　　2.2.1 常规观察 实验期间空白组动物活动、饮食正常、皮毛光亮整洁、体重持续增长，其余各组在灌胃给予高脂乳液两周后逐渐出现不同程度的精神萎靡、活动减少、体重增加缓慢、无力、蜷缩、饮食减少、皮毛凌乱、萎黄等。

　　2.2.2 体重及肝脏器系数测定 结果提示，灌胃给予高脂乳液一定周期后，模型对照组体重增加缓慢，和空白对照组比较差异有显著性（P&<0.01），苯扎贝特酯剂量组和易善福组在给药前4周均有抵抗大鼠体重增加缓慢的作用趋势，但差异无显著性。

　　另脂肪肝模型大鼠的肝脏指数较空白组明显升高（P&<0.01）； 苯扎贝特酯剂量组和易善福组均有降低脂肪肝模型大鼠的肝脏器系数的作用趋势，但无统计学意义。结果见表2。表2苯扎贝特酯对大鼠脂肪肝体重及肝脏器系数的影响（略）注：和模型组比较，**P&<0.01

　　2.3 血清中ALT﹑AST的含量动态测定 结果见表3。表3苯扎贝特酯对大鼠脂肪肝血清中ALT、AST的含量的影响（略）注：和模型组比较，*P＜0.05，**P&<0.01

　　ALT主要存在于肝细胞浆内，肝内该酶的活性比血清高100倍，是最敏感的肝功能检测指标之一。AST在心肌中含量最高，肝脏为第二位，AST主要分布肝细胞的线粒体中，在发生肝损伤时，其漏出量较ALT低。

　　当急性肝炎和慢性肝炎和轻型，虽有肝细胞的损伤，肝细胞的线粒体仍保持完整，故释放入血的只有存在于肝细胞浆内的ALT，故ALT升高明显；重型肝炎和慢性肝炎的中型和重型，肝细胞的线粒体也遭到了严重的破坏，AST从线粒体和胞浆内释出，AST也明显升高。

　　结果提示，在给予高脂乳液4周，8周后，脂肪肝模型大鼠血清中ALT的活性明显较空白组明显升高（P&<0.01）；与模型对照组相比，苯扎贝特酯剂量组及易善复组均能明显降低模型大鼠ALT活性（P&<0.05），表明苯扎贝特酯具有一定的降酶作用。

　　但脂肪肝模型大鼠血清中AST未明显升高，原因可能为我们通过高脂乳液造成的非酒精性脂肪肝模型，该模型病变程度较轻，肝细胞的线粒体未遭到严重的破坏。

　　2.4 肝脏肉眼大体外观变化情况 空白组肝脏肉眼观察呈鲜红色，边缘锐利，表面光滑。脂肪肝模型对照组肉眼见肝脏体积增大，边缘变钝，颜色呈奶黄色，切面油腻状，有明显脂肪颗粒，提示病变基础是肝细胞脂肪积聚；苯扎贝特酯给药组和易善复组肝脏肉眼观察有部分肝脏呈鲜红色。2.5 肝组织内甘油三酯的含量 结果见表4。表4苯扎贝特酯对脂肪肝大鼠肝组织内TG的影响（略）注：和模型组比较，*P＜0.05，**P&<0.01

　　脂肪肝主要是甘油三酯大量堆积于肝脏所致的一种病理改变，因此测定肝组织中甘油三酯的含量尤为重要，结果提示，非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞内甘油三酯含量明显升高，与空白组比较，差异有非常显著性（P&<0.01）， 苯扎贝特酯剂量组及易善复组，均能显著降低大鼠肝组织内甘油三酯的含量（P&<0.05），表明苯扎贝特酯具有一定的降低大鼠肝脂肪变性的作用。

　　2.6 肝组织病理学分析（HE染色，100×） 见表5、表6、表7。表5肝组织病理损伤判断标准 表6肝病理分级结果（略）表7苯扎贝特酯对脂肪肝大鼠肝脏病理的影响 注：与模型组比较：*P&<0.05，**P&<0.01

　　由表6、表7可知，模型组与空白对照组比较，出现了肝细胞的脂肪变性，经非参数检验，差异有非常显著性（P&<0.01），表明造模成功；与模型组比较，苯扎贝特酯剂量组及易善复组均可显著降低肝脂肪变性程度（P&<0.05），表明苯扎贝特酯具有一定的降低脂肪肝大鼠脂肪变性的作用。

　　3 讨论

　　脂肪肝（Fatty Liver）作为一种病理学概念，系指肝内脂肪含量超过肝湿重的5%，或肝活检1/3以上肝细胞有脂肪变性且弥漫分布于全肝。其对应的临床概念是脂肪性肝病（Fatty Liver Disease，FLD），系指病变主体在肝小叶，以弥漫性肝细胞脂肪变（多为大泡性脂肪变）为病理特征的临床综合征。目前，按相关专业委员会的疾病诊断标准及有关共识可以明确的是：（1）脂肪性肝病在临床上根据患者有无过量饮酒史，分酒精性脂肪性肝病（酒精性脂肪肝）和非酒精性脂肪性肝病；（2）酒精性肝病临床诊断通常分为轻症酒精性肝病、酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化；（3）非酒精性脂肪性肝病一般在病理上分为单纯性脂肪肝以及由其演变的脂肪性肝炎（NASH）和肝硬化三种类型。

　　本次实验研究旨在通过高脂乳液灌胃大鼠，造成大鼠非酒精单纯性脂肪肝模型，考查该化合物药对大鼠非酒精单纯性脂肪肝的防治作用，实验结果表明，模型对照组与空白对照组比较，肝脏器系数﹑ALT活性、肝组织甘油三酯含量均显著升高，同时肝病理也显示出现了一定的脂肪变性，按照专业委员会的诊断标准，该模型属于非酒精脂肪肝肝炎模型；苯扎贝特酯剂量组和模型对照组比较，可显著降低ALT活性及肝组织甘油三酯含量，同时也可减轻肝脂肪变性的程度。

　　综上所述：苯扎贝特酯试剂有一定的抗非酒精单纯性大鼠脂肪肝的作用，因样品量较少，只做了一个剂量，下一步会侧重对量效关系及其机制的研究。

参考文献