作者：周婷婷，李胜涛，冯桂芳，刘行
【摘要】 目的 观察内关注射香丹注射液预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。方法采用大鼠冠状动脉左前降支根部穿线结扎建立心肌缺血再灌注损伤模型。观察心电图S-T段变化，心肌组织ET、NO、NOS含量及计算ET/NO比值。结果结扎30min，模型组较空白对照组S-T段明显抬高，再灌注30min，香丹组较模型组，心电图S-T段下降明显（P&<0.05～0.01）；香丹组能明显增加心肌组织的NO含量和NOS的活性（P&<0.05～0.01）；香丹组能明显降低心肌组织ET的含量和ET/NO的比值（P&<0.05～0.01）。结论内关注射香丹注射液预处理能减轻冠脉血管内皮损伤，抑制冠脉血管过度收缩或舒张，调节血管舒缩功能，对抗心肌缺血再灌注损伤。
【关键词】 香丹注射液；内关穴位；心肌缺血再灌注
心肌缺血再灌注损伤一直是国内外医学界十分关注的课题，也是研究的热门课题。本实验研究通过内关穴位注射香丹注射液预处理的方法，观察心肌组织ET、NO、NOS含量及计算ET/NO比值，观察心电图的变化，探讨本法对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响。
1材料与方法
1.1实验药物香丹注射液（湖北清大迪康药业有限公司，国药准字：Z42020392，批号：090115）；复方丹参滴丸（天津天士力制药股份有限公司，国药准字：Z10950111，批号：090621）。
1.2动物SD大鼠，清洁级，雌雄各半，体质量240～260g，由四川省医学科学院实验动物研究所生产，动物合格证号：SCXK（川）2008-24。
1.3试剂一氧化氮试剂盒（硝酸还原酶法）、一氧化氮合酶（NOS总）试剂盒（南京建成生物工程研究所生产，批号：20100612）；内皮素（ET）酶联免疫测试盒（美国RD公司，批号：20100622）。
1.4仪器BL420E+生物信号记录分析系统（成都泰盟有限公司）；SN-3001酶标仪（Thermo Formo公司生产）。
1.5方法SD按质量分层随机分为5组，即空白组、模型组、内关注射香丹组、内关注射盐水组和丹参滴丸组。除空白组和模型组外，香丹组和盐水组依照《大鼠穴位图谱的研制》［1］定位“内关”穴位，分别注射香丹注射液、0.9%氯化钠注射液，给药剂量均为每次0.1ml，左、右内关穴交替连续注射，预处理14d。丹参滴丸组灌胃丹参滴丸水溶液，给药剂量为270mg/kg/d ，预处理14d。第15d末次处理后，大鼠20%乌拉坦腹腔注射麻醉，取仰卧位固定于鼠板，连接生物信号记录分析系统，记录正常心电图。行气管插管，连接小动物呼吸机。于第三、四肋间隙切开胸，破心包膜，小拉钩牵拉胸壁，使心脏充分暴露。在左心耳下方2mm处，冠状动脉左前降支上1/3处用无创性小圆针穿线，进针深度为1.0～1.5m，宽度为 2~3mm，适应5min，穿线处置一硅胶管（1.5mm），连同硅胶管一起结扎冠状动脉左前降支 (空白组仅穿线不结扎)，同步监测心电图，以QRS波群增高、增宽，ST段抬高为结扎成功标志。排出胸腔气体，关闭胸腔。于结扎成功30min后，剪断结扎线， 拔除硅胶管。恢复左前降支灌流，以抬高的ST段下降，T波逐渐恢复为再灌注成功标志，再灌注60min，复制大鼠心肌缺血再灌注模型［2］。分别检测正常心电图、结扎30min及再灌注30min心电图ST段的变化，同时，实验结束后，摘取心脏，根据检测所需剪取左心室前壁部，即受损心肌部分，制备10%组织匀浆，按试剂盒说明书检测心肌组织中NO、NOS和ET的含量，并计算NO/ET比值。
2结果
2.1对心电图ST段的影响由表1可知，与空白组相比较，模型组结扎后30min心电图S-T段明显抬高，说明造模成功；再灌注30min，与模型组相比较，香丹组心电图S-T段下降明显（P&<0.05～0.01），缺血再灌注损伤心肌恢复较好。表1内关穴注射香丹注射液对心肌缺血再灌注模型大鼠心电图S-T段的影响(略)
2.2对心肌组织NO的影响由表2可知，与空白相比较，模型组大鼠在心肌缺血再灌注1h后心肌组织的NO含量和NOS活性明显降低；与模型组相比较，香丹组能明显增加心肌组织的NO含量和NOS的活性（P&<0.05～0.01），扩张冠脉，增加冠脉血流量。表2香丹对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌组织NO及NOS的影响(略)
2.3对心肌组织ET的影响（ELISA法）由表3可知，与空白组相比较，模型组大鼠在心肌缺血再灌注1h后心肌组织ET的含量和ET/NO比值明显增加；与模型组相比较，香丹组能明显降低心肌组织ET的含量和ET/NO的比值（P&<0.05～0.01），减轻冠脉血管内皮损伤，抑制冠脉血管过度收缩或舒张，调节血管舒缩功能，对抗心肌缺血再灌注损伤。表3香丹对心肌缺血再灌注模型大鼠心肌组织ET的影响(略)
3讨论
心肌缺血再灌注损伤是多因素的复杂环节，目前公认的损伤机制有以下几个方面［3］：氧自由基、钙超载、能量代谢障碍、中性粒细胞激活、血管内皮细胞功能障碍、心肌细胞凋亡。再灌注期激活的血管内皮细胞分泌内皮源性舒张因子(主要是一氧化氮，NO)障碍，而分泌血管收缩物质(内皮素，ET)增加，导致冠脉血管收缩、血小板聚集，加重心肌缺血和损伤。ET不仅具有强大的长效缩血管作用，还具有促血小板、单核巨噬细胞的聚集、黏附的作用［4］，还是强大的促平滑肌细胞增生剂［5］。ET过量释放可引起冠状动脉痉挛、心肌缺血坏死，加重心肌缺血再灌注损伤。NO是内皮合成和分泌的最重要的扩血管物质；在体内NO主要由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)催化生成［6］。NOS、NO在调节血管稳态中发挥着重要的作用，内皮功能失调所致的疾病大多与NOS、NO的释放和活性受损有关。
本实验研究表明内关穴位注射香丹注射液能明显降低心肌组织ET的含量，增加心肌组织NOS的活性，增加NO的生成，NO含量明显增加，明显降低心肌组织ET/NO的比值。因此我们可以看出，一方面可以抑制冠脉血管内皮损伤或血管收缩，另一方面扩张冠脉，增加冠脉血流量，从而减轻心肌缺血再灌注损伤的程度，对心肌细胞起到良好的保护作用，这可能是其防治心肌缺血再灌注损伤的机理之一。希望通过动物试验的结果为今后的临床应用奠定可靠的应用依据和理论基础。
参考文献
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［5］滕志涛，蔡尚郎，沃金善，等.Abciximab对动脉损伤后血清一氧化氮和内皮素水平的影响［J］.中国介入心脏病学杂志，2004，12:51-52.
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