作者：邢俊波，曹红，陈玉敏，水彩红，胡丹，姜春来
【摘要】 目的 建立用气相色谱法同时测定伤痛宁膏中薄荷脑和水杨酸甲酯含量的方法。方法 以正十五烷为内标物，DB-WAX弹性石英毛细管柱(30 m×0.32 mm，0.25 μm)，FID检测器，氮气为载气，柱温为130 ℃，检测器温度为200 ℃，分流比为12∶1。结果 共测定了6批样品，在该色谱条件下，薄荷脑和水杨酸甲酯及内标物正十五烷均得到良好的分离。薄荷脑和水杨酸甲酯的加样回收率分别为101.52%(RSD=2.66%)、100.34%(RSD=3.38%)。结论 本法灵敏、准确，重复性好，可用于控制该制剂的质量。
【关键词】 气相色谱法;薄荷脑;水杨酸甲酯;伤痛宁膏;含量测定
Abstract：Objective To establish a capillary gas chromatography method for the determination of menthol and methyl salicylate in Shangtongning adhesive plaster. Methods The internal standard substance of n-Pentadecane was employed. The GC system consisted of a DB-WAX capillary column (30 m×0.32 mm， 0.25 μm)， nitrogen as the carrier gas， column temperature at 130 ℃， FID as the detector at 200 ℃， and with a split ratio of 12∶1. Results The contents of menthol and methyl salicylate in 6 lots of samples were determined and the constituents concerned were separated well under the chromatographic condition. The average recovery of menthol and methyl salicylate were 101.52% (RSD=2.66%) and 100.34% (RSD=3.38%)， respectively. Conclusion The method was sensitive， accurate， specific and suitable for the quality control of the preparation.
Key words：capillary gas chromatography;menthol;methyl salicylate;Shangtongning adhesive plaster;content determination
伤痛宁膏由黄柏、红花等9味中药组成，收载于《卫生部药品标准》，具有活血散瘀、消肿止痛功效，用于关节扭伤、肌肉拉伤、韧带捩伤等急性软组织损伤。原标准中无含量测定项。为更好地控制质量，本试验建立了气相色谱法测定样品中薄荷脑和水杨酸甲酯含量的方法。现报道如下。
1 仪器与试药
Agilent 6890N气相色谱仪，FID检测器(美国惠普公司)。薄荷脑对照品(0728-9304)、水杨酸甲酯对照品(110708- 200506)均购自中国药品生物制品检定所。伤痛宁膏分别购自河南健康制药公司(批号20060501、20061001、20061002)、武汉长丰制药公司(批号060303、060304、060401)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent 6890N气相色谱仪，氢火焰离子化检测器(FID);DB-WAX弹性石英毛细管柱(30 m×0.32 mm，膜厚度0.25 μm)。氮气流速为30 mL/min，空气流速为400 mL/min;柱温为130 ℃;进样口温度为200 ℃，检测器温度为200 ℃，分流比为12∶1。
2.2 专属性试验
按处方量配制缺薄荷脑、水杨酸甲酯原料的阴性对照样品，比较了供试品溶液、薄荷脑和水杨酸甲酯对照品溶液、阴性对照样品液的色谱图，结果在上述色谱条件下，样品中薄荷脑、水杨酸甲酯峰与其他组分色谱峰能达到基线分离，阴性对照液色谱峰对测定无干扰(见图1)。
2.3 供试品溶液的制备
取本品5片，剪成小条(0.5 cm×5～7 cm)，除去盖衬，取约1.5 g，置具塞锥形瓶中，精密称定。精密加入内标溶液50 mL，称定重量，密塞，超声处理(功率300 W，频率40 kHz)15 min，放冷至室温，用内标溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
2.4 校正因子的测定
取正十五烷适量，精密称定，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.09 mg的溶液，作为内标溶液。另取薄荷脑对照品、水杨酸甲酯对照品适量，精密称定，加内标溶液分别制成每1 mL各含0.2 mg与0.15 mg的溶液，摇匀，吸取1 μL注入气相色谱仪，计算校正因子。
2.5 线性关系的考察
精密称取薄荷脑对照品、水杨酸甲酯对照品适量，加内标溶液溶解并分别制成每1 mL各含1.909、1.414 mg的溶液，作为储备液。分别精密量取对照品储备溶液0.2、0.4、0.6、1.0、1.5、2.0 mL置于10 mL量瓶中，加内标溶液至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液1 μL，注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，以浓度(mg/mL)为横坐标，峰面积与内标峰面积比为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。线性方程为：薄荷脑Y=9.336 6X+0.019 7，r2=0.999 7;水杨酸甲酯Y=5.978 8X-0.001 3，r2=0.999 8。结果表明，薄荷脑、水杨酸甲酯分别在0.0381 8～0.381 8 mg/mL、0.028 3～0.283 mg/mL范围内有良好的线性关系。
2.6 稳定性试验
取同一批号(20061001)的供试品溶液，精密吸取1 μL，每间隔一定时间进样，测定，以峰面积考察。薄荷脑RSD=1.30%，水杨酸甲酯RSD=1.37%，结果表明，供试品溶液在15 h内基本稳定，说明本方法有良好的稳定性。
2.7 重复性试验
取同一批号的伤痛宁膏(批号20061001)6份，按含量测定方法项下平行试验，测定其含量，结果薄荷脑含量为5.20 mg/g，水杨酸甲酯含量为3.95 mg/g。
2.8 加样回收率试验
称取6份已知含量的同一批样品(批号20061001，薄荷脑含量为5.197 5 mg/g，水杨酸甲酯含量为3.951 1 mg/g)约0.75 g，精密称定，分别精密加入对照品适量，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，测定其含量，计算回收率。结果薄荷脑平均回收率为101.52%，水杨酸甲酯平均回收率为100.34%。见表1。
2.9 样品测定
取本品6批，按上述色谱条件测定，计算薄荷脑、水杨酸甲酯的含量，结果见表2。表1 加样回收率试验结果
3 讨论
参考文献
[1-2]方法，对本品测定方法进行了优化。在供试液处理中，加入内标物正十五烷，使内标物与待测成分经历相同的处理过程，可提高测定结果的准确度。相对外标法，具有更高的准确性和易操作性。在对供试液的前处理过程中，比较了冷浸、超声和水蒸气蒸馏法等不同提取方法，无水乙醇、乙醇、乙酸乙酯等不同提取溶剂，以及不同超声时间(5、15、30 min)的提取效率，根据提取结果，结合试验操作的简便性，进行综合考虑，确定了本试验的最终提取条件。水蒸气蒸馏法所制备的供试液相对纯净，但含量比本试验中处理方法要低，因此未选用。本试验建立的气相色谱测定方法灵敏、准确、重复性好，提高了制剂的质量控制水平。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2005.665.
[2] 刘 杰，董文玲.4种中药橡胶膏剂中樟脑、薄荷脑、冰片和水杨酸甲酯含量的气相色谱法测定[J].中成药，2004，26(10)：798.