高效液相色谱法测定大风丸中蛇床子素的含量

【摘要】 目的 建立大风丸中蛇床子素含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法，Diamonsil ODS1 C18柱，流动相为甲醇-0.1 mol/L硫酸铵溶液(70∶30)，用硫酸溶液(1→5)调pH为2.5，流速为1.0 mL/min，检测波长322 nm。结果 蛇床子素在0.101～0.808 μg范围内呈良好线性，回归方程为Y＝9.964 406×10-3X－1.355 684×10-1，r＝0.999 5，平均加样回收率为98.4%，RSD＝1.40%(n＝6)。结论 本方法简便、准确，专属性强，测定结果重复性好，是大风丸中蛇床子素定量分析的有效方法。

【关键词】 大风丸；蛇床子素；高效液相色谱法；含量测定

　　Abstract：Objective To establish the method for determining the content of Fructus Cnidii in Dafeng wan by HPLC. Methods Diamonsil ODS1 C18 column was used with CH3OH-0.1 mol/L (NH4)2SO4 (70︰30) [adjust pH to 2.5 by sulphuric acid solution (1→5)] as the mobile phase. The detection wavelength was set at 322 nm and flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration curve was linear at the range of 0.101～0.808 μg for the Fructus Cnidii and linear equation was Y＝9.964 406×10-3X－1.355 684×10-1， r＝0.999 5. The average recovery was 98.4% and RSD was 1.40% (n＝6). Conclusion This method was simple and accurate， with good specificity and repeatability， which provides scientific quantitative analysis method of Fructus Cnidii in Dafeng wan.

　　Key words：Dafeng wan；Fructus Cnidii；HPLC；content determination

　　大风丸收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第六册，原标准中只有鉴别项检查，没有含量控制项。本处方中的君药独活为伞形科植物重齿当归Angelica pubescens Maxim. f.biserrata Shan et Yuan的干燥根，蛇床子素为独活的主要成分之一。为更好控制产品质量，我们参照有关文献[1]，对大风丸中蛇床子素的含量测定进行了试验研究。

　　1 仪器与试药

　　高效液相色谱仪(SPD-10A，日本岛津)；紫外分光光度仪(上海康化生化仪器制造厂)；超声波清洗器(SK3200H，上海科导超声仪器有限公司)。蛇床子素对照品(批号11082-200305，供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供；大风丸(批号20070401、20070402、20070403)由河南百年康鑫药业有限公司提供。其他试剂均为分析纯

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件与系统适用性试验

　　以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为甲醇-0.1 mol/L硫酸铵溶液(70∶30)，用硫酸溶液(1→5)调pH为2.5；检测波长为322 nm；流速为1 mL/min；柱温为室温。理论塔板数按蛇床子素峰计算应不低于1 500。

　　2.2 溶液的制备

　　对照品溶液的制备：精密称取蛇床子素对照品适量，加甲醇制成每1 mL中含蛇床子素40 μg，摇匀，即得。

　　供试品溶液的制备：取本品研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入10 mL甲醇，称定重量，超声(功率135 W，频率59 kHz)20 min，放冷后再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

　　2.3 线性关系考察

　　精密称取蛇床子素对照品适量，用甲醇溶解，制成每1 mL含1.01 mg蛇床子素的溶液。分别精密吸取适量，稀释成10.1、20.2、40.4、60.6、80.8 μg/mL 5个不同浓度样品，分别吸取上述溶液各10 μL进样，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，蛇床子素的浓度为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：Y＝9.964 406×10-3X－1.355 684×10-1，r＝0.999 5(n＝5)，表明蛇床子素在0.101～0.808 μg之间呈良好的线性关系。

　　2.4 精密度试验

　　精密吸取对照品溶液(40.4 μg/mL)10 μL，连续进样5次，记录峰面积，结果RSD＝0.63%，表明本法精密度良好。

　　2.5 重复性试验

　　取本品(批号20070401)20丸，研细，混合均匀，取5份，每份0.5 g，精密称定，照供试品溶液制备方法制成供试品溶液，照上述色谱条件进行测定，结果RSD＝0.64%，表明本法重复性良好。

　　2.6 稳定性试验

　　取同一供试品溶液(批号20070401)，分别在0、2、4、6、8 h进样10 μL，测定蛇床子素峰面积，RSD＝3.29%(n＝5)，表明供试品溶液在8 h内稳定。

　　2.7 加样回收率试验

　　精密称取已知含量的同一批号供试品(批号20070401，蛇床子素含量0.988 3 mg/g)6份，取样量为0.25 g，精密称定，分别加入蛇床子素对照品，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，进样量10 μL，测定蛇床子素峰面积，计算蛇床子素含量(见表1)，平均回收率为98.4%，RSD＝1.40%(n＝6)。 表1 加样回收率试验结果（略）

　　2.8 样品含量测定

　　按照供试品溶液制备方法制备3批供试品溶液并进行含量测定，结果见表2。表2 含量测定结果（略）

　　2.9 阴性试验

　　取缺独活的样品，按供试品溶液制备法制备阴性样品，进样测定，在蛇床子素相应位置无峰出现，说明阴性样品的其他成分无干扰。色谱图见图1。

　　3 讨论

　　本品中每克含独活以蛇床子素(C15H16O3)计，均不少于0.9 mg，由于各地独活药材差别较大，因此，暂定本品每克含独活以蛇床子素(C15H16O3)计，不得少于0.8 mg。

　　供试品溶液制备中对超声时间进行了试验，分别超声处理(功率135 W，频率59 kHz)10、20、30 min，结果超声20 min即可提取完全。采用高效液相色谱法测定蛇床子素含量，方法简便快速，稳定可靠，专属性强。

参考文献