关于HPLC法测定金茵颗粒剂中绿原酸的含量

　　　　 作者：李涛，麒麟，苗术，刘建华

【摘要】 目的 采用高效液相色谱法测定金茵颗粒剂中绿原酸的含量。方法 Kroasil ODS 柱(4.6 mm×250 mm)；柱温：室温；流动相：0.3%乙酸-甲醇(74∶26)；流速：0.9 mL/min；检测波长：327 nm。结果 该方法的线性范围为65～325 μg/mL，回归方程为：A=24 239 869C-31 292，r=0.999 3；平均回收率为100.10 %，RSD=0.87%(n=6)。结论 该方法可作为金茵颗粒剂的质量控制方法。

【关键词】 高效液相色谱法；金茵颗粒剂；绿原酸；含量测定

　　Abstract：Objective To establish a HPLC method to determind the content of chlorogenic acid in Jinyin Granules. Method The mobile phase was 0.3%HAc-Methonal (74∶26). The UV detection wavelength was 327 nm. The mobile speed was 0.9 mL/min. Separation column was Kroasil ODS (4.6 mm×250 mm). Result A good linearity was obtained in the range of 65～325 μg， regression A=24 239 869C-31 292， r=0.999 3. The average recovery was 100.10%， RSD was 0.87% (n=6). Conclusion The method was good for determining chlorogenic acid in Jinyin Granules.
　　
　　Key words：HPLC；Jinyin Granules；chlorogenic acid；content determination

　　金茵颗粒剂是由金钱草、茵陈、枳实、熊胆粉等6味中药材经水提取、减压干燥后与一定量糖粉混合，经现代工艺制备而成，具有清热解毒、利胆退黄、行气止痛之功效，可用于治疗胆囊炎、胆结石等病症。茵陈中的绿原酸是该颗粒剂中的有效成分，因此，我们建立了该制剂中绿原酸的HPLC测定方法，该法具有快速、准确、灵敏度高的特点，可作为该制剂的质量控制方法。

　　1 仪器与试药

　　Waters公司高效液相色谱仪，包括Waters-600输液泵、2487紫外-可见光检测器、7725i手动进样器。
　　
　　绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号753-9003)，金茵颗粒剂由齐齐哈尔医学院研制生产(批号030305，030306，030307)。甲醇为色谱纯，水为超纯水，冰醋酸为分析纯。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件[1]

　　Kroasil ODS 柱(4.6 mm×250 mm)；柱温：室温；流动相：0.3%乙酸-甲醇(74∶26)；流速：0.9 mL/min；检测波长：327 nm；进样量10 μL；流动相经0.45 μm微孔滤膜过滤。在本实验条件下，绿原酸的色谱峰分离较好(见图1)。

　　2.2 对照品溶液的配制
　　
　　精密称取绿原酸对照品13 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。

　　2.3 标准曲线的建立
　　
　　精密吸取上述绿原酸对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件分别进样10 μL(每份重复进样2次)，测得峰面积。以峰面积A为纵坐标、绿原酸对照品溶液的浓度(C)为横坐标，绘制标准曲线，并求得线性回归方程为：A=24 239 869C-31 292，r=0.999 7。

　　2.4 供试品溶液的制备[2]
　　
　　精密称取本品适量(0.8 g)，加热水30 mL使溶解，静置后过滤，热水洗涤。合并滤液，调pH值至2.0，用乙酸乙酯提取6次，第1次15 mL，以后每次10 mL，合并乙酸乙酯提取液，水浴蒸干，用甲醇稀释至2 mL，过0.45 μm滤膜，作为供试品溶液。

　　2.5 阴性对照液的制备

　　按处方比例称取除茵陈以外的其它药材，按生产工艺方法制得阴性样品后，按供试品溶液制备方法制得阴性对照溶液。

　　2.6 回收率试验

　　精密称取已知绿原酸含量的金茵颗粒剂0.8 g，共6份，准确加入绿原酸对照品，按样品测定项下方法操作，结果见表1。表1 回收率试验结果（略）

　　2.7 精密度试验

　　取对照品溶液重复进样6次，计算平均峰面积A=4 688 660，
RSD=0.87%。

　　2.8 稳定性试验

　　在室温条件下，将对照品溶液和样品溶液分别放置0、2、4、6、8 h后进行测定，测得样品含量，RSD分别为1.02%和0.90%。

　　2.9 重现性试验

　　精密称定同一批号的样品5份(批号030305)，按样品测定项下条件，测得样品中绿原酸的含量，RSD=0.93%。

　　2.10 绿原酸含量的测定
　　
　　取3批金茵颗粒剂样品分别制成供试品溶液，按上述色谱条件测定，根据上述回归方程，求得绿原酸含量，结果见表2。表2 金茵颗粒剂中绿原酸含量测定结果（略）

　　3 讨论
　　
　　本试验采用多种提取方法，用甲醇超声提取干扰成分与主成分不能得到很好的分离，用乙酸乙酯回流提取、超声提取结果不理想。
　　
　　在本试验所采用的绿原酸提取方法中，pH值应控制在1.5～2.5之间，乙酸乙酯提取6次可将绿原酸提取完全。
　　
　　流动相中加入少量的酸可抑制色谱峰拖尾。

参考文献