注射用复方荭草冻干粉针对大鼠凝血系统影响的实验分析

【摘要】 目的 探讨注射用复方荭草冻干粉针（WHG）对大鼠凝血系统的影响，探讨其发挥活血化瘀作用的机理。方法 以Wistar大鼠为研究对象，通过测定其凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(FIB)，观察WHG对大鼠凝血系统的影响。结果 WHG 对大鼠凝血系统有显著影响，显著延长PT，APTT，TT(P＜0.05); 显著降低FIB的含量(P＜0.05)。结论 注射用复方荭草冻干粉针通过影响大鼠凝血系统的多个环节发挥抗凝血作用。
【关键词】 注射用复方荭草冻干粉针 凝血系统 活血化瘀 抗凝血
　　注射用复方荭草冻干粉针剂是以贵州地产药材荭草为主药，根据传统苗族用药理论，结合现代制药技术及活性分析的技术与方法，研制出的中药新药。其具有改善冠脉循环、降低心肌耗氧量、减轻实验性心肌缺血损伤作用[1]，用于冠心病、心绞痛心血瘀阻所致胸痹心痛证。本实验在WHG药效学筛选研究的基础上，通过测定大鼠凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原( FIB) 4 项指标观察WHG对大鼠凝血及纤溶系统的影响，阐述WHG发挥活血化瘀、抗凝血作用的机理，为其临床应用提供依据。
　　1 材料与方法
　　1.1 动物
　　健康SD大鼠，体重180-220g，雌雄各半，由贵阳医学院实验动物中心提供。（合格证号:SCXK(黔)2007-0001）。
　　1.2 实验药品
　　盐酸川芎嗪(091103A3，哈尔滨三联药业有限公司)；注射用注射用复方荭草冻干粉针 (20100105，由贵阳医学院贵州省药物制剂重点实验室制备)。
　　1.3 实验试剂与材料
　　1.3.1 实验试剂
　　凝血酶原时间测定试剂盒（PT凝血酶STG20101-44，PT缓冲液STG40102-44)；凝血酶时间测定试剂盒(TT凝血酶STG20301-30，TT缓冲液STG40302-30）；活化部分凝血酶原时间测定试剂盒（APTT STG20201-22，CaCl2，STY50202-23）；纤维蛋白原含量测定试剂盒（FIB STG20401-29，FIB缓冲液STG300402-19），均为北京世帝科学仪器公司产品。
　　1.3.2 实验仪器
　　EL204电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；凝血仪(北京世帝科学仪器有限公司，LG-PABER I型)；冷冻离心机（美国贝克曼公司，Allegra64R）。
　　1.4 统计方法
　　应用SPSS 13.0统计学软件进行分析，计量资料以（x-±s）表示， 组间比较采用t检验， 以P&<0.05为差异有统计学意义。
　　2 方法
　　取体重为180-220g的SD大鼠50只， 雌雄各半。随机分为阴性对照组（生理盐水）、川芎嗪组（阳性组），WHG组高剂量组（13.5g/kg），WHG组中剂量组（6.8g/kg），WHG组低剂量组（3.4g/kg），每组10只。每天尾静脉注射给药，连续10天。取血前大鼠禁食12小时，禁食不禁水，于末次给药后30分钟，大鼠股静脉采血　　1.8ml，置于含3.8%枸橼酸钠0.2 ml的离心管中，立即轻轻地上下颠倒混匀10次，2500×g离心10 min，分离血浆，保持室内温度在26℃±2℃，在4小时之内先后按各指标试剂盒的要求进行凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、 血浆纤维蛋白原( FIB) 的测定 [2]。
　　3 结果
　　WHG高、中剂量组均明显延长大鼠的PT、APTT、TT，并显著性降低大鼠FIB含量，与正常对照组比较，均有显著性差异（P＜0.05），表明注射用复方荭草冻干粉针通过作用于内源性及外源性凝血系统发挥抗凝血作用。实验结果见表1～4。
　　表1 WHG连续10天给药对大鼠PT的影响(x-±s，n=10)
　　
　　注：与对照组比较，＊p&<0.05
　　表2 WHG连续10天给药对大鼠APTT的影响(x-±s，n=10)
　　
　　注：与对照组比较，＊p&<0.05 转贴于 　　 表3 WHG连续10天给药对大鼠TT的影响(x-±s，n=10)
　　
　　注：与对照组比较，＊p&<0.05，＊＊p&<0.01
　　表4 WHG连续10天给药对大鼠FIB的影响(x-±s，n=10)
　　
　　注：与对照组比较，＊p&<0.05
　　4 讨论
　　冠心病是当前严重威胁人类健康和生命的最常见的疾病之一。其发病原因是冠状动脉粥样硬化使循环血量减少。Salomaa等报告指出，血液流变性异常、血液处于高凝状态、纤维蛋白原增高是男、女冠心病的强危险因素，冠心病患者由于其动脉粥样硬化形成和内皮细胞受损，导致冠脉不全或完全阻塞[3]。
　　冠状动脉或外周动脉血栓形成是各种疾病发生或死亡的主要原因，而血栓形成是凝血酶原以及溶血系统共同作用的结果，研究已证实，冠心病血瘀证存在着高凝血和低纤溶状态，处于高凝状态的机体易于形成血栓，目前国际上对抗凝药物普遍认同的检测指标为TT，APTT 和 PT[4]。临床上常用 PT 来反映外源性凝血途径的功能 ，它的延长或缩短分别反映凝血因子 Ⅶ、 Ⅹ、 Ⅴ、 Ⅱ(凝血酶原 )和 Ⅰ(纤维蛋白原 )的血浆水平减低或增高；APTT 反映内源性凝血途径的功能， APTT与PT均延长，见于共同途径凝血因子的减少;TT作为纤溶系统的筛选试验; APTT和 TT的延长与内源系统凝血酶的抑制有关，其延长或缩短分别反映凝血因子 Ⅻ、 Ⅺ、前激肽释放酶 Ⅴ、Ⅱ和Ⅰ的血浆水平减低或增高[5]。FIB是一凝血因子，与其他高分子化合物比较，分子结构不对称，对血浆黏滞度影响最大。有资料证明，PT、APTT、TT、FIB是监测凝血与纤溶系统有价值的实验室指标 ，并对血栓性疾病的诊断、疗效观察具有重要的参考价值[6]。实验结果表明，注射用复方荭草冻干粉针能显著延长大鼠PT，APTT，TT，并降低大鼠FIB的含量。本实验结果初步提示注射用复方荭草冻干粉针通过影响内源性、外源性和共同凝血途径发挥抗凝血的作用，注射用复方荭草冻干粉针活血化瘀的作用可能与其抗凝血作用有关，为其临床应用提供了依据。

　　参 考 文 献
　　[1] 陶玲，沈祥春，王永林等，注射用复方荭草冻干粉针剂对兔离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用.时珍同医国药，2006，17(9):1650.
　　[2] 韩学军，李建华，静脉采血对凝血四项结果的影响.华北煤炭医学院学报，2009，11(4):486.
　　[3] 王焱，黄石安，李果明，参芎葡萄糖注射液治疗冠心病合并高粘血症的临床研究.中国血液流变学杂志，2008，18(3):352.
　　[4] 郭齐，李连达，齐向辉，牡丹皮有效组分重组方对家兔血小板聚集及凝血功能的影响.中国现代应用药学，2010，27(11):970.
　　[5] 王辉，刘刚，罗顺德，莲心碱对血小板聚集、凝血功能和血栓形成的影响.中国药理学通报， 2010，26 (6) : 770～771.
　　[6] 郑泽荣，黄敏，陈建强等，依达拉奉联合苦碟子对急性脑梗死患者凝血纤溶系统的影响. 中西医结合心脑血管病杂志，2010:8(9):1067.