关于转化生长因子β1在胆管癌组织中的表达及意义

　　　　　　　　　　 作者：张建余 胡宗玲 张炳远 李玉军

【关键词】 胆管肿瘤；转化生长因子β1；免疫组织化学，
　 【摘要】 目的 研究转化生长因子β1（TGFβ1）在胆管癌组织中的表达，探讨它与胆管癌生物学行为及预后的关系。方法 应用免疫组织化学SP法检测47例胆管癌及癌旁正常胆管组织中TGFβ1的表达，分析其表达与胆管癌临床病理特征的关系，结果进行统计学处理。结果 TGFβ1阳性表达主要定位于胆管癌细胞胞浆，偶有胞膜、胞核着色。47例胆管癌组织中TGFβ1阳性表达36例(766%)，较癌旁正常胆管组织高（P&<0001）。TGFβ1表达与胆管癌临床分期及是否有淋巴结、肝转移有关（P&<001，005，005），与组织学分级无关（P&>005）。结论 TGFβ1可能参与了胆管癌的发生、发展。随着胆管癌临床分期的增高而TGFβ1表达增高，其基因缺失可能是胆管癌细胞侵袭性生长转移的重要分子机制，检测TGFβ1表达有助于判断胆管癌的恶性程度及预后。
　　【关键词】 胆管肿瘤；转化生长因子β1；免疫组织化学
　　【Abstract】 Objective To study the expression of TGFβ1 in cholangiocarcinoma tissues and its biological behavior.Methods TGFβ1 was detected by immunohistochemical methods in 47 paraffinembedded specimens of cholangiocarcinoma and the control tissues near to the tumor. Results Expression of TGFβ1 was significantly higher in cholangiocarcinoma than that of control tissues near to the tumor(P&<0001).There was significantly relation between TGFβ1 expression and clinical stages，lymph node and liver metastasis(P&<001，0.05，0.05)，and no difference in histological grade. Conclusion Smad4 and TGFβ1，TGFβRⅡ may play an important role in the occurrence and development of cholangiocarcinoma. Loss of Smad4 and TGFβRⅡgene may be one of the significant molecular biological mechanism.
　　【Key words】 bile duct neoplasm，transforming growth factorβ1，immunohistochemistry
　　胆管癌早期临床症状不明显，早期发现和治疗成为临床面临的一大难题，其发生涉及多种癌基因的激活及抑癌基因的失活。转化生长因子β1(TGFβ1)是一种多功能细胞因子，在信号转导中发挥重要的生物学作用，研究表明， TGFβ1在胆管炎症中有较高的表达［1］。TGFβ1信号转导与肿瘤的关系在胰腺癌、结直肠癌、胃癌、乳癌等众多的恶性肿瘤中屡有报道，在胆管癌中的作用国内未见报道，国外研究亦及少。本研究通过免疫组化检测TGFβ1在胆管癌中的表达，旨在探讨与胆管癌生物学行为及预后的关系。
　　1 材料和方法
　　1.1 标本来源 收集青岛大学医学院附属医院1998年5月-2001年10月间47例手术切除的胆管癌（肝外胆管癌）病人的存档组织蜡块，每例均有详细的临床资料及手术记录，全部病例均经病理证实。其中男25例，女22例，年龄39~78岁［平均（552±76）岁］。按CT显示肿瘤大小08~6 cm， 其中≤20 cm者14例，&>20 cm 33例。 按部位分肝门部胆管癌（上段癌）27例，中段癌7例，下段癌13例。临床pTNM分期Ⅰ期6例，Ⅱ期13例，Ⅲ期21例，Ⅳ期7例。组织学分级Ⅰ级（高分化）10例，Ⅱ级（中分化）20例，Ⅲ级（低分化）17例。临床和病理证实有区域淋巴结转移者16例，肝转移10例，无转移者26例，同时有淋巴结和肝转移者5例。
　　1.2 方法 采用免疫组化SP法。试剂： TGFβ1山羊抗人多克隆抗体，美国Santa Cruz公司产品。免疫组化试剂盒来自中山生物技术有限公司。
　　1.3 免疫组织化学结果判定标准 由两位病理工作者共同阅片并取均数，染色强度在×100倍镜下清楚可见棕黄色颗粒，阳性细胞数≥10%定为阳性病例，阳性细胞数&<10%为阴性病例。
　　1.4 统计学处理 根据资料性质分别应用χ2检验、精确检验法。
　　2 结果
　　2.1 TGFβ1在胆管癌组织及癌旁正常胆管组织中的分布和差异 TGFβ1阳性表达主要定位于胆管癌细胞胞浆，偶见胞膜、胞核着色，呈棕黄色或浅黄色，见图1、图2。TGFβ1阳性表达在胆管癌及癌旁正常胆管组织中的表达有显著性差别（χ2＝22.55， P&<0.001），见表1。 图1 TGFβ1在胆管癌组织学中的表达。SP×200 图2 TGFβ1在胆管癌组织中的表达。SP×200 表1 TGFβ1表达在胆管癌及癌旁正常胆管组织中的差异 组织类型例数TGFβ1表达阳性胆管癌4736(766)癌旁正常组织4713(277) 2.2 TGFβ1表达与胆管癌组织分级、临床分期的关系 TGFβ1在胆管癌中随组织学分级的增高而增高，但统计学处理并无差异（精确检验法， Ⅰ与Ⅱ、Ⅱ与Ⅲ、Ⅰ与Ⅲ比较分别P＝03178，02730，02756，TGFβ1阳性表达与临床分期有关，Ⅰ+Ⅱ期阳性表达显著低于Ⅲ+Ⅳ期（χ2＝1021，P&<001），见表2。表2 TGFβ1表达与胆管癌组织分级、临床分期的关系分级分期例数TGFβ1表达阳性组织学分级
　　2.3 TGFβ1表达与胆管癌淋巴结、肝转移的关系 TGFβ1在胆管癌中的阳性表达无转移者与是否淋巴结转移（χ2＝532，P&<005）及肝转移（精确检验， P＝00208）有关，见表3。表3 TGFβ1表达无转移者与有淋巴结、肝转移的关系转移情况例数TGFβ1表达阳性淋巴结转移1615肝转移1010无转移2616　　 注：χ2或精确检验，P&<005
　　3 讨论

胆管癌近20年发病率呈逐渐上升的趋势，发现时多为晚期，手术切除率低，预后差，早期诊断和治疗是临床面临的一大难题。研究表明，信号传导通路异常与肿瘤的发生、发展及肿瘤细胞的浸润、转移密切相关。TGFβ1通过信号转导通路发挥着重要的生物学效应，它调节细胞的增殖、分化、凋亡、迁移、粘附以及胞外基质的产生。TGFβ1的跨膜信号转导，将信号递呈给细胞核，激活核转录。此基因的缺失、突变将导致信号转导中断，导致细胞的过度分裂、增殖，无限制生长，致肿瘤形成，它将信号从细胞表面传到细胞核的过程中具有重要作用。TGFβ1 是Mr2500的二聚体，经激活后获得有活性的TGFβ1，它是一种多功能生长调节因子，对大多数上皮起源的细胞增殖均有抑制作用，对上皮起源的肿瘤具有负调节作用，它通过信号转导通路产生重要的生物学效应。研究发现多数肿瘤细胞有TGFβ1的高表达，结直肠癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌及子宫内膜癌等均有高表达， 其高表达与肿瘤的演进、转移有关［2，4］。Boivin［5］在研究小鼠胃腺体时发现TGFβ1表达缺失的小鼠胃小弯粘液腺增生，提示TGFβ1抑制胃粘膜生长。Bedossa［6］应用原位杂交和免疫组化技术都证明原发性肝癌细胞有TGFβ1的高表达，表明TGFβ1不但在转录水平而且在翻译水平上都表达增强，且高表达患者侵袭转移能力强，预后差。我们通过免疫组化方法研究结果显示TGFβ1阳性反应物主要分布于胆管癌上皮细胞胞浆，呈棕黄色染色，阳性表达766%（36/47），而在癌旁正常胆管组织细胞中阳性表达277%（13/47），差异有极显著性意义。TGFβ1高表达随组织学分级的增高而增高（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为70%，75%，823%），但统计学处理并无差别。TGFβ1表达与临床分期有关，Ⅰ+Ⅱ期阳性表达显著低于Ⅲ+Ⅳ期。TGFβ1表达与是否有淋巴结、肝转移有关，这表明TGFβ1随着临床分期增高及肿瘤转移侵袭能力增强而表达增高，即晚期胆管癌有TGFβ1的高表达。与TGFβ1负性生长调节作用相反，为什么在高表达的TGFβ1的胆管癌细胞增长得不到抑制呢？这可能与胆管癌细胞中TGFβ1受体基因突变、缺失或受体后下游信号传导中断及TGFβ1本身生物活性有关。TGFβ1不但是一种很强的生长抑制因子，而且具有较强的免疫抑制作用，它可抑制免疫活性细胞的增殖分化。晚期胆管癌有TGFβ1的高表达可能与TGFβ1能刺激肿瘤内的血管生成、抑制淋巴细胞的免疫作用有关，或肿瘤自分泌的TGFβ1对其自身无明显作用，可通过旁分泌抑制周围组织增殖、减少癌细胞增殖的空间限制，为癌细胞的生长创造良好环境［7］。我们通过免疫组化对胆管癌组织中TGFβ1蛋白表达的研究发现，随着胆管癌临床分期的增高而TGFβ1表达增高，揭示出TGFβ1可能参与胆管癌的发生、发展。检测TGFβ1蛋白对判断胆管癌潜在的侵袭、转移及预后有重要意义。
　　参 考 文 献
　　1刘海双，蔡景修，顾红光，等. TGFβ1及其受体在炎性胆管壁中的表达及意义［Ｊ］. 世界华人消化杂志，1999，1（5）：342
　　2Hirayama D， Fujimori T， Satanaka K， et al. Immunohistochemical study of epidermal growth factor and transforming growth factor-beta in the penetrating type of early gastric cancer［Ｊ］. Human Pathol， 1992，23:681
　　3Girsch SM， Memoli VA， Stukel TA，et al. Immunohistochemical staining for transforming growth factor-beta1 associated with disease progression in human breast cancer［Ｊ］.Cancer Res， 1992，52:6949
　　4Eastham JA， Troung LD， Rogers E，et al. Transforming growth factorβ1: Comparative immunohistochemical localization in human primary and metastatic prostate cancer［Ｊ］. Lab Invest， 1995， 73∶628
　　5Boivin GP， Molina JR， Ormsby I， et al. Gastric lesions in transforming growth factor beta1 heterozygous mice［J］. Lab Invest， 1996，74:513
　　6Bedossa P， Peltier E， Terris B， et al. Transforming growth factorbeta 1( TGFβ1) receptors in normal， cirrhotic and neoplastic human livers［J］. Hepatology， 1995，21:760
　　7Lu Z，Friess H，Graber HU，et al. Presence of two signaling TGFbeta receptors in human pancreatic cancer correlates with advanced tumor stage［J］.Dig Dis Sci，1997，42(10):2054