【关键词】 儿童白血病 血管内皮细胞生长因子 胰岛素样生长因子-1
Abstract objective: to study the effect of the VEGF and IGF-1 in children with leukemia and the relationship between them.Methods:To test the purity of plasma VEGF and IGF-1 with double antibody sandwich respectively ELISA and radiation immune analysis (RIA) technology In 16 cases of normal children and 20 cases of acute lymphocytic leukemia cell children.Results: plasma VEGF children increased significantly compared with the control content (t=2.81，P &< 0.01); Most serum IGF-1 level significantly lower than in control group (t = 14.84，P &< 0.01)， the IGF-1 level of children with leukemia completely response after six months was obviously higher than before treatment (t =13.77，P &< 0.01). Plasma VEGF and IGF-1 content was significantly negative correlation. Conclusion: serum VEGF and IGF-1 level could be used as a clinical diagnosis index of ALL children .
Key words children with leukemia VEGF IGF-1
白血病是儿童最常见的肿瘤性疾病，其中急性淋巴细胞白血病（Acute lymphoblastic leukemia，ALL）占儿童白血病的75％以上，严重威胁着儿童的健康。血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)通过促进血管内皮细胞有丝分裂，从而促进血管新生，在肿瘤细胞的增殖、浸润和转移中起重要作用[1]。胰岛素样生长因子-1( insulin-like growth factor-1，IGF-1)可调控细胞增殖与凋亡［2］，同时对造血干细胞的增殖、分化、成熟以及功能的激活也具有调控作用［3］，对肿瘤细胞同样有相同的作用。本研究分别采用双抗体夹心ELISA法和放射免疫分析(RIA) 技术检测16例正常儿童和20例急性淋巴细胞白血病(acute lymphocytic leukemia，ALL)患儿血浆VEGF、IGF-1含量，旨在探讨二者在急性淋巴细胞白血病发生、发展中的作用，以及两者之间的相互关系，从而为进一步诊治本病寻求新的方法和思路。
1 资料和方法
1.1 研究对象
20例ALL患儿均为本院2006~2010年住院的初治患者，男12例，女8例，年龄17个月~14岁，中位年龄8岁。所有患者均经临床及骨髓细胞形态学、细胞化学染色确诊， 均为初次确诊且未进行任何治疗，无严重营养不良或内分泌疾病，在规范化疗 1个疗程后达到完全缓解者。诊断及化疗均依据1999 年《小儿急性淋巴细胞白血病诊疗建议( 第二次修订草案) 》［4］。正常对照组：健康体检儿童16例，男10例，女6例，年龄6~13岁，中位年龄10岁，排除血液病、肿瘤、结缔组织病、感染性疾病等。
1.2 标本采集
所有病例均晚餐后禁食，第 2天清晨抽取空腹静脉血约 3 mL，4℃、2 000 r/min 离心 10 min 收集血清，置－70℃冰箱保存，观察组标本采自治疗前和完全缓解后 6 个月。
1.3 测定方法
严格按说明书由专人盲法双复管一次性测定，VEGF检测采用双抗体夹心ELISA法，试剂盒购自深圳晶美公司。血清 IGF-1 采用平衡饱和竞争放射免疫分析( RIA) 技术，试剂盒为天津九鼎医学生物工程有限公司生产。
1.4 统计学分析
采用 SPSS 13.0 软件统计分析，计量资料采用均数±标准差( x±s) 表示，组间比较采用 t 检验，P＜0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1 ALL患儿各组血浆VEGF水平
与正常对照组相比，ALL初治患儿治疗前血浆VEGF含量明显增高，两组差异有显著性意义(t为2.81，P &<0.01)。缓解组与对照组相比差异无显著性。见表1。
2.2 血清 IGF-1 水平
观察组患儿初诊时血清 IGF-1 水平显著低于对照组，差异有统计学意义( t = 14.84，P＜0.01) 。完全缓解 6 个月后 IGF-1 水平明显高于治疗前( t =13.77，P＜0.01)，与对照组比较差异无统计学意义( t =1.64，P ＞0.05) 。见表 1。
表 1 各组血清 IGF-1 和 IGFBP-3 表达变化 (x±s)
组别
例数
VEGF(ng/L)
IGF-1（ng/mL）
对照组
16
77. 21±32.09
31±4
观察组
治疗前
20
96.18±28.96 a
18±3 a
缓解后
20
79.02±35.18 a，b
29 ±3 a，b
a: 与对照组相比，P ＜ 0.01; b: 与观察组治疗前相比，P ＜ 0.01
2.3 ALL患儿血浆VEGF与IGF-1水平的关系 采用直线相关分析，结果显示ALL初治患儿治疗前血浆VEGF和IGF-1含量增高具有一定的相关性(r=-0.48，P&<0. 01)。转贴于 3 讨论
急性淋巴细胞白血病是儿童最常见的白血病，其发病与多种因素有关，但其生物学本质依然是通过新生血管的形成，引发肿瘤细胞的生长和数目的增多，从而完成肿瘤细胞的增殖和分化。这同实体瘤中的研究结果是一致的 [1，5]。目前的研究证实，在众多参与肿瘤血管形成的细胞因子中，VEGF在肿瘤的血管形成中起着重要的作用，是主要的促进血管生成因子。VEGF 是一种多功能糖蛋白，具有促进血管通透性增加、血管内皮细胞分裂、增殖及诱导血管生成等作用。VEGF 是血管形成和血管通透性调控因子，它在血管形成过程中的重要作用已得到共认。虽然正常或者恶性造血祖细胞均能分泌 VEGF，但在正常造血干/祖细胞中 VEGF不表达或表达极低。国外的研究认为血管新生与儿童 AL 的预后有着密切的关系。它主要通过与血管内皮细胞上高亲和力的受体相结合而发挥作用。当VEGF与受体结合后，激活的受体诱导酪氨酸激酶激活，导致内皮细胞增殖和细胞迁移。本研究显示，20例ALL患儿血浆VEGF含量，与对照组相比明显升高，这与近年[5]的报道一致，提示血管新生参与了ALL的发生，同时可间接反映患者骨髓中血管新生的程度， 说明在ALL的发病中起着重要的作用。其可能的机制为VEGF在急性白血病中高表达，与骨髓微血管密度(MVD)密切相关，白血病细胞表达、释放VEGF ，VEGF通过与VEGF受体结合促进血管内皮细胞增殖和新生血管形成，为白血病细胞的生长提供必要条件。也有学者认为，ALL骨髓细胞的异常增生，刺激产生缺氧诱导因子(HIF)，促进其分泌、合成，进一步上调VEGF的表达，诱导血管新生，癌基因与抑癌基因异常活化，导致该病的发生。有相关研究已证实，对于白血病，VEGF不但促进白血病细胞增殖、浸润作用，而且可延缓树突状细胞的成熟，抵抗放、化疗所致的白血病细胞的凋亡[5-6]。
1957年Salmon和Daughaday首次发现IGF，目前对于它的认识，已发展为一个广泛的由 IGFs、胰岛素样生长因子受体( insulin-like growth factor receptor，IGFR) 、IGFBPs 组成的多肽家族。它是一个对于人体正常生理功能起重要作用的系统，IGF-1是其中的一种，对其认识研究发现IGF作为一种多功能细胞生长调控因子，不仅与正常细胞的增殖、分化、凋亡密切相关，且促进肿瘤细胞的分化、生长。［2，7］。它的结构与胰岛素原相似，在肿瘤细胞中，能通过肿瘤细胞自分泌及旁分泌产生，作为很强的丝裂原，促进肿瘤细胞分化、生长。它广泛存在与人体各个组织器官中，包括造血细胞中合成、分泌，但对于血液中的IGF-1，主要是由肝脏来合成分泌的。它的促肿瘤活性主要是通过与特异性的靶细胞表面的受体 IGF-1R结合而起作用［8］。
ALL近年来发病呈上升趋势。目前国内外研究均表明，多数肿瘤包括白血病具有产生 IGF-1 的能力，在恶性肿瘤患者的血液中存在着高水平的 IGF-1，体内外实验均证实有效降低 IGF-1 水平后，肿瘤细胞的凋亡明显增加，肿瘤的生长受到明显有效的抑制［9，10］。本研究结果显示 ALL 患儿血清 IGF-1 水平在治疗前较对照组明显降低，与之前预测的结果不一致。这让我们想到了患儿的营养状况。在白血病患儿中，大多均存在着严重营养不良，热卡、蛋白摄入不足和机体内蛋白质消耗量增加，已存在肝脏浸润、肝功能损伤，影响蛋白质合成，这也是造成 ALL 患儿血清 IGF-1 下降的原因之一。本研究还表明， ALL初治患儿治疗前血浆VEGF和IGF-1含量的增高和IGF-1含量的降低具有相关性，两者呈明显负相关。但二者之间的相互作用机制仍需进一步研究。
综上所述，测定血清VEGF、IGF-1水平对进一步了解 ALL 的发生、病情变化有一定的意义，今后可能成为儿童 ALL 诊断的临床指标。靶向抑制VEGF的表达可能成为治疗ALL的一条新途径。此外，二者在血清中的含量可能还受到患儿营养状况、饮食等多方面饮食的影响，以判断能否作为判断 ALL 发生、发展过程的观察指标，均有待我们更深入的研究，我们目前的实验数据仅仅为今后继续深入研究提供了重要的线索。
参考文献
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