摘 要：目的：观察经细胞培养灭活验证的狂犬疫苗接种后的免疫效果，评价其安全性，为临床应用安全有效的狂犬疫苗提供依据。方法：使用经细胞培养灭活验证的狂犬疫苗，选择14~62岁暴露者共50例作为研究对象，按照国家药品临床管理规定和中国生物制品规程狂犬病疫苗免疫检测标准，观察50例研究对象免疫接种后，局部反应，全身反应和抗体水平。结果：所有接种对象抗体阳性率为100%，抗体几何平均滴度（GMT）为70.12×10?nmol·(s·L)﹣?（4.02 IU/ml），轻度局部副反应的发生率为0.91%，轻度全身副反应的发生率为1.03%，所有接种对象均未出现严重局部副反应和严重的全身副反应。结论：本研究所使用的基于细胞培养灭活验证的狂犬疫苗具有良好的安全性，轻度副反应发生率低，无严重副反应，免疫保护效果好，具有临床应用价值。
关键词：狂犬疫苗；细胞培养灭活验证法；临床研究
细胞培养灭活验证法是将狂犬病疫苗样品及不同病毒含量的CTN病毒悬液在Vero细胞上培养3周，细胞经丙酮固定后，通过免疫荧光法检测，确定样品中有无残余感染性病毒存在，验证细胞培养法的灵敏度和重复性，保证CTN病毒灭活安全性，避免灭活疫苗安全隐患。《中国药典》2005年版(三部)收载的“人用狂犬病疫苗”规定病毒灭活验证试验为直接小鼠脑内接种法[1]。而本次调查则是基于狂犬病疫苗细胞培养灭活验证法的建立的研究分析，观察其接种后的免疫效果，评价经细胞培养灭活验证的狂犬疫苗的安全性，为临床应用安全有效的狂犬疫苗提供依据，现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料
本组50例不同性别暴露者，年龄为14~62岁，平均年龄（30.25±3.78）岁，其中男性32例，女性18例。研究对象的入选标准为：①研究对象年龄&>3岁；②必须获得研究对象本人或其监护人的同意；③研究对象被动物致伤程度在Ⅱ度以下（接触或者喂养动物或者完好的皮肤被舔为I度，裸露的皮肤被轻咬或者无出血的轻微抓伤、擦伤为Ⅱ度，破损的皮肤被舔，或者开放性伤口、粘膜被污染为Ⅲ度[2]），未注射狂犬免疫球蛋白。研究对象的排除标准为：①体温过高者 (腋下体温&>37．5℃)；②免疫缺陷病患者或正接受免疫抑制剂治疗的患者；③3年内有狂犬疫苗接种史者；④狂犬病患者。
1.2方法
记录50例研究对象的基本信息，包括年龄，性别，职业，联系方式，基础体温，暴露史，过敏史等，使用经细胞培养灭活验证的狂犬病疫苗对50例暴露者进行常规免疫接种，分别于暴露后0、3、7、14、28d上臂三角肌肌肉注射狂犬疫苗，并根据国家药品临床管理规定和中国生物制品规程狂犬病疫苗免疫检测标准进行追踪观察，每针次后分别记录24h，48h，72h免疫接种反应，观察有无局部或全身反应，同时对反应程度进行判断，按无、弱、中、强四个程度分级。
1.3数据处理
本研究的所有数据与资料均采用SPSS18.0统计学软件进行处理分析。
2结果
所有接种对象血清抗体检测，阳性率为100%，抗体几何平均滴度（GMT）为70.12×10?nmol·(s·L)﹣?（4.02 IU/ml），轻度局部副反应（注射部位有痒感）的发生率为0.91%，轻度全身副反应（体温超过正常值但低于38℃）的发生率为1.03%，所有接种对象均未出现严重局部副反应（注射部位出现红肿，硬结）和严重的全身副反应（头晕、恶心）。
狂犬病是一种由狂犬病毒引起的人兽共患的自然疫源性疾病，病死率为100％，是迄今为止人类病死率最高的急性传染病，患狂犬病的犬是人感染狂犬病的主要传染源，我国大部分的养犬户，尤其农户饲养的犬均未注射过兽用狂犬疫苗[3]。人被这些患病的犬或其他患病动物咬伤、抓伤后，患狂犬病的危险为30％～70％，狂犬病的潜伏期长短不一，可防不可治，所以必须尽早进行免疫接种狂犬疫苗。狂犬病的病死率高高与多方面因素有关。如被犬咬伤后，患者由于缺乏狂犬病防治知识，存在侥幸心理，认为家养犬不会感染狂犬病毒，未采取正确的伤口处理方法以及狂犬病疫苗接种措施。此外，由于对所使用的狂犬疫苗安全性和有效性存在质疑，担心免疫接种后的副反应，因而部分患者对此顾虑较大。
狂犬病疫苗主要用于暴露后免疫，而狂犬病一旦发病，则死亡率为100%，迄今为止尚无有效的治疗方法。目前，安全有效的预防措施是注射高质量的狂犬病疫苗和狂犬病免疫球蛋白，才能防止暴露者狂犬病的发生，降低死亡率。但狂犬病疫苗的免疫效果受多重因素影响，如疫苗效价、质量，保存、运输、接种以及接种者身体素质等，所产生抗体的时间与水平并不一致，故未能达到100％的免疫水平。有资料[4]显示部分患者注射疫苗后体内未产生相应的保护性抗体，曾发生过有接种狂犬病疫苗失败而发生狂犬病的情况，由此可见，狂犬病疫苗注射后必须进行抗体检测，预防接种安全可靠的疫苗及检测抗体，评定疫苗效果，可以有效地控制狂犬病的发生和传播。经实验初步证实，细胞培养灭活验证法作为人用狂犬病疫苗灭活验证的检查方法，具有重复性，且灵敏度高，特异性好，已被国内外部分生产企业所采用。此法提高了灭活病毒检测灵敏度，减少了因病毒灭活不彻底给人用狂犬病疫苗带来的安全隐患。狂犬病疫苗最低效价WHO推荐剂量是≥2．5μmol/S·剂，抗体几何平均滴度GMT达到0.5x16.67×10×10?nmol·(s·L)﹣?以上方可有效。本组研究平均GMT为70.12×10?nmol·(s·L)﹣?（4.02 IU/ml）远远高于WHO推荐标准，起到了良好的免疫保护效果，且无一例严重副反应发生。有研究[5]建议在以后狂犬疫苗与被动免疫制剂联合使用中，狂犬疫苗5针全程注射完成后于15天、30天各加强狂犬疫苗1个剂量，并劝导患者忌口，戒除不良嗜好，同时避免使用对狂犬疫苗免疫效果有影响的药物。本研究证实所采用的经细胞培养灭活验证的狂犬病疫苗安全，有效，轻度副反应发生率低，无严重副反应，质量稳定，但免疫接种后抗体水平维持的持久性有待今后进一步探讨。
参考文献
[1] 洪小栩，苏文全，陶文健.人用狂犬病疫苗病毒灭活验证试验方法修订的建议[J].中国药品标准，2009，10(3):166—168.
[2] 万敏.犬伤患者全程接种狂犬疫苗现状调查[J].按摩与康复医学（下旬刊），2011，02(5)：32—33.
[3] 吕志红，曹亚荀，高红琴．关于狂犬疫苗三种不同免疫程序有效性及安全性的研究[J]. 山西医科大学学报，2011，42(9) :742—744.
[4] 姚红霞.注射人用狂犬疫苗126例基本情况的调查与分析[J].医学信息（下旬刊），2009，1(6):247.
[5] 向远.559例人用纯化狂犬疫苗(Vero细胞)免疫效果分析[J].中国中医药现代远程教育，2010，08(17):260—261.