作者：秦华珍，李彬，时博，李世阳，郑作文，邓家刚
【摘要】 目的观察广西桂郁金（GGYJ）对卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)所致小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法采用BCG+LPS尾静脉注射造成免疫性肝损伤动物模型，观察GGYJ对各组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLO）的含量及肝组织匀浆超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平的影响。结果GGYJ可明显降低免疫性肝损伤小鼠血清中ALT、AST、GLO水平，升高血清ALB水平，提高A/G的比值；减少肝组织匀浆的MDA含量，升高肝匀浆SOD、GSH-Px含量。结论GGYJ对BCG+ LPS尾静脉注射造成的小鼠免疫性肝损伤有明显的保护作用，其作用与抗脂质过氧化有关。
【关键词】 GGYJ； 免疫性肝损伤； 保护作用
广西桂郁金（GGYJ）是商品郁金的品种之一，为姜科植物广西莪术Curcuma kwangsiensis S. G. Lee et C.F. Liang的块根。主产于广西，近几年产量约占全国郁金总产量的60%以上［1］，对我国市场有较大的影响力。郁金具有活血化瘀、行气解郁、清心开窍、利胆退黄的功效，临床常用于各种肝胆疾病［2～4］。据统计，目前我国大约有1.2亿乙型肝炎病毒（HBV）感染者，慢性乙肝病人超过3000万，国内乙型肝炎病毒感染的人数远远高于其他肝炎病毒感染人数。在我国法定报告传染病中，乙肝发病数和发病率一直高居前列［5］。广西是乙肝的高发区，1996～2005年乙肝报告发病率始终处于全区各类传染病报告发病的前3位［6］。为了筛选治疗肝炎的药物，本实验对GGYJ抗免疫性肝损伤的作用进行了观察，现报告如下。
1 材料与仪器
1.1 动物清洁级昆明种小鼠72只， 体质量(20±2)ｇ，雌雄各半，由广西医科大学实验动物中心提供，动物许可证号：SCXK 桂 2003-0003。
1.2 药材GGYJ：采集于广西玉林，经广西中医学院中药鉴定学教研室蔡毅教授鉴定为姜科植物广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C. F. Liang的块根。取GGYJ药材分别加12倍、10倍量水提取2次，第1次2h，第2次1.5h，提取液经过滤、合并、浓缩成可供小鼠灌胃的最大浓度的稠膏，相当于3.4g生药/ml。
1.3 试剂BCG：中国生物技术集团公司上海生物制品研究所生产，批号：2004060501；大肠杆菌LPS：Sigma公司产品，进口分装；联苯双酯(BPD)：广州市星群药业有限公司，批号： 20050422；ALT、AST测定试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：050423；SOD、MDA、GSH-Px：南京建成生物工程研究所，批号：050606。
1.4 仪器半自动生化分析仪（德国），型号Chem300；高速低温离心机（德国），Biofuge stratos；超声波细胞粉碎机，宁波新芝科器研究院，型号JY92-2D；Agilent8453紫外可见分光光度计；722-紫外光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂。
2 方法
2.1 分组动物随机分为6组，即空白对照组，模型对照组，BPD对照组（研末，以蒸馏水配成一定浓度的混悬液，剂量为600 mg/kg），GGYJ高、中、低剂量组（28，14，7g/kg），每组12只。各组按体重分别以0.2 ml/10g剂量给药，1次/d，连续给药12 d。
2.2 造模给药第1天造模，除空白对照组外，其余5组小鼠均尾静脉注射BCG溶液（用生理盐水配置BCG溶液，使每ml约含108个活菌）0.2ml/只。12 d后经尾静脉注射7.5μg LPS生理盐水溶液，空白对照组同法给予等量的生理盐水，禁食（自由饮水）10 h后各组经眼球后静脉丛取血，常规分离血清。然后处死小鼠，取肝脏，用生理盐水配10%肝组织，用超声波细胞粉碎机匀浆，低温离心，按试剂盒说明书所述方法检测血清ALT、AST的含量（赖氏法），按试剂盒说明书所述方法用Agilent8453紫外可见分光光度计测定肝匀浆中SOD，MDA，GSH-Px的含量。
2.3 统计学处理各项数据均以±s表示，统计分析采用SPSS13.0软件进行。
3 实验结果
3.1 对血清ALT、AST含量的影响实验结果见表1。表1 GGYJ对免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST的影响（略）
表1显示，与空白组相比较，模型组血清ALT、AST水平升高， P<0.01，说明模型建立成功。与模型组比较，BPD组及GGYJ高、中剂量组均能非常显著地降低小鼠血清中升高的ALT水平（ P<0.01）；GGYJ低剂量组则显示无效；在降低小鼠血清ALT水平上，GGYJ高剂量组与BPD组作用相当；而GGYJ中、低剂量组的作用弱于BPD组与GGYJ高剂量组（P<0.01，P<0.05）；GGYJ中、低剂量组与高剂量组之间降低ALT水平的作用存在量效关系。与模型组比较，BPD组、GGYJ高、中剂量组均能显著降低小鼠血清中AST的水平（P<0.01，P<0.05），GGYJ低剂量组则显示无效；GGYJ高、中剂量组降低小鼠血清AST水平的作用与BPD组相当；而GGYJ高、中剂量组组间比较无统计学意义，GGYJ低剂量组与高剂量组之间存在量效关系。
3.2 对血清ALB及GLO含量的影响实验结果见表2。表2 GGYJ对免疫性肝损伤小鼠血清ALB及GLO含量的影响（略）
表2显示，与空白组比较，模型组ALB含量明显降低（P﹤0.01），各给药组均能明显提高ALB含量（P﹤0.01），其中GGYJ高剂量组已经接近正常组水平。与空白组比较，模型组动物血清中GLO含量明显升高（P﹤0.01），GGYJ高剂量组GLO含量无明显变化，与空白组相近；BPD组与GGYJ中、低剂量组GLO含量也升高，但不及模型组；而各给药组均能明显提高A/G比值，GGYJ高、中剂量组有非常显著性意义（P﹤0.01），低剂量组有显著性意义（P﹤0.05）。
3.3 对肝匀浆SOD、MDA、GSH-Px水平的影响实验结果见表3。表3 GGYJ对免疫性肝损伤小鼠肝匀浆SOD、MDA、GSH-Px水平的影响（略）
表3显示，与空白组比较，模型组、BPD组、GGYJ高、中、低剂量组肝匀浆SOD、GSH-PX水平显著降低（P<0.01），MDA水平显著增高（P<0.01）。BPD组、GGYJ高、中、低剂量组均能升高模型小鼠肝匀浆SOD、GSH-Px的水平（P<0.01），降低MDA的水平（P<0.01）。GGYJ高、中剂量组升高SOD的作用与BPD组相近，GGYJ低剂量组的作用不及BPD组（P<0.01）；GGYJ高、中、低剂量组在升高小鼠肝匀浆SOD水平方面呈一定的量效关系。GGYJ高剂量组降低MDA水平、升高GSH-Px的水平的作用与BPD组相近，GGYJ中、低剂量组的作用不及BPD组（P<0.01）；GGYJ高剂量组与中、低剂量组在降低MDA水平方面有量效关系（P<0.05），GGYJ高、低剂量组之间在升高GSH-Px的水平方面存在量效关系（P<0.05）。
4 讨论
肝脏是含酶丰富的脏器，在肝脏出现组织损伤或细胞破坏、坏死时，酶从细胞内逸出进入血液。因此，血清ALT，AST的升高是肝损伤的重要标志。肝脏是合成蛋白质的重要场所，在蛋白质代谢中起着重要的作用，肝功能受损可以使蛋白质的合成、细胞内运输和释放发生障碍，从而导致血清ALB减少，GLO升高，A/G比值降低。MDA是脂质过氧化的最终产物，其含量与脂质过氧化反应呈正比；而作为抗氧化酶系统主要物质之一的SOD含量的高低反映了机体清除氧自由基的能力。GSH-Px是机体内广泛存在的一种重要的过氧化物分解的酶，一般认为它在细胞内能清除有害的过氧化物代谢产物，阻断脂质过氧化链锁反应，从而起到保护细胞膜结构和功能完整的作用。
给小鼠注射BCG可使巨噬细胞和中性多核粒细胞聚集于肝脏，使肝脏处于致敏状态，继而用低毒剂量的LPS攻击，可激发这些细胞释放对肝细胞有毒性的可溶性因子，造成免疫性肝损伤［7］。
本实验结果表明，BCG与LPS联用可以引起小鼠血清中ALT，AST，GLO水平明显升高，ALB水平降低，A/G比值下降，造成免疫性肝损伤。GGYJ各剂量组能使血清中ALT，AST，GLO，ALB，A/G比值向正常水平恢复；并能升高肝损伤小鼠肝细胞浆内SOD，GSH-Px的水平， 降低MDA的水平，其中高、中剂量组作用较佳，明显优于低剂量组。表明GGYJ通过抗氧化实现其抗肝损伤效应。在提高抗氧化相关酶活性的同时降低了肝细胞浆MDA的水平。
参考文献
［1］陆善旦.广西GGYJ产销调查及预测. http://www.100md.com 2003-03-05.
［2］姜宏伟，叶 虹.郁金治疗淤胆型肝炎的研究［J］.现代中西医结合杂志，2006，15（4）：433.
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［4］杜炳会. 二黄郁金汤治疗急性胆囊炎36例［J］. 中国中医急症，2005，14（10）：939.
［5］李玉衡.我国的乙肝防治工作任重道远［J］.首都医药，2008，1：29.
［6］沈立萍，杨进业，莫兆军，等.广西壮族自治区1996-2005年乙型肝炎发病状况监测分析［J］.疾病控制杂志，2007，11（2）：210.
［7］徐叔云.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1349.