动态观察处于灰区的乙肝表面抗原的变化趋势

　　 作者：张汉奎，苗霞，何结冰，陈桂山，蔡常辉，张秀明

【摘要】 　　目的：对乙肝表面抗原（HBsAg）检测中处于灰区范围内的患者进行动态观察，分析其发展趋势，提高检测准确度。 方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法，选取HBsAg初检结果在灰区范围的117例，并在1年后对117例复检标本进行HBsAg复检实验。结果：117例标本1年后的复检试验中，24例ELISA结果≥1.2，阳性率为20.5%；29例ELISA结果≤0.8，阴性率为24.8%；诊断明确标本数53例，占总标本的45.3%；其余64例复检标本ELISA结果仍处于0.8～1.2之间，其占总标本的54.7%。结论：检测HBsAg实验结果处于灰区范围的被检者进行动态观察，特别在一定时间间隔内重新取样检查，可以明显提高检测的准确度及HBsAg检验的应用价值，有的甚至还可以发现产生灰区的原因。

【关键词】 乙肝表面抗原；酶联免疫吸附试验；灰区范围；复检

　　［ABSTRACT］ Objective: To consecutively observe patients with gray interval results of HBsAg Assay，analyze the trend，and to raise the detecting accuracy. Methods: A total of 117 patients with gray interval results of HBsAg Assay were selected by ELISA assay and were tested again one year later. Results: Out of 117 samples， there were 24 samples with ELISA results higher than 1.2 (positive rate as 20.5%)，and 29 samples lower than 0.8 (negative rate as 24.8%). A total of 53 samples were confirmed accounting for 45.3%， and the rest 64 samples had the ELISA results between 0.8 and 1.2， accounting for 54.7%，Conclusions: Dynamic monitoring samples with gray interval results of HBsAg Assay， especially repeated detection one year later，can markedly boost accuracy.
　　
　　［KEY WORDS］ HbsAg; ELISA; Grey area; Retest
　　
　　我国是乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染的高发区，HBV携带者已超过10%的人口。HBV具有明显的嗜肝特性，可致持续性病毒感染［1，2］。通常判断HBV感染及其状况的指标为HBV的血清学标志物，主要包括HBsAg、抗HBs、HBeAg、抗HBe、抗HBc、抗HBc IgM及HBV DNA等［3］。酶联免疫吸附试验（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）检测HBsAg因其灵敏度高， 特异性强等优点而成为目前最常用的检测手段之一。采用ELISA方法检测HBsAg时，常以CutOff值（CO值）做为结果阴阳性的判定的分界线标准。我们实验室将0.8≤CO值＜1.2设为灰区。目前实验结果的灰区问题仍是困扰各实验室HBsAg检测的一大难题。现有的实验室技术难以判断灰区结果的真伪；而HBV携带的亚健康者同正常健康者在临床表现上又没有明显的差异。由此造成HBsAg检测结果处于灰区范围时对其难以解释；被检者也因不能确定自己是否真的感染了乙型肝炎病毒而烦恼。本文对HBsAg检测结果处于灰区范围的被检者进行动态观察，现把观察结果报道如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料
　　
　　2006年7月～2008年9月期间，来我院康体保健中心进行健康体检，且HBsAg初检结果位于灰区范围内的体检者117例，其中，男性68例，女性49例；年龄在15～44岁之间。

　　1.2 方法
　　
　　对117例体检者在一年后进行复检，抽取其血液进行去除脂血、黄疸、溶血。HBsAg检测试剂为中山生物工程有限公司生产的乙型肝炎病毒表面抗原一步法检测诊断试剂盒。酶标仪为［（热电（上海）仪器有限公司）］的WellscanMK3，洗板机为（苏州新波生物技术有限公司）的Egate2310。严格按照乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒操作说明，应用ELISA的方法进行标本检测，酶标仪判读实验结果，并用本院检验科LIS系统上相应的分析方法处理实验数据，得出S/CO值。

　　2 结果
　　
　　117例HBsAg复检者中，超出灰区范围上限24例，即24例体检者S/CO值在1.2或1.2以上（其中S/CO值在2.0以上有12例），判定为明确的阳性结果，占总标数的20.5%；低于灰区范围下限 29例，即29例结果S/CO值在0.8以下，判定为明确的阴性结果，占总标数的24.8%。二者之和即117例复检标本的明确实验诊断的总例数，占总标本数的45.3%（53/117），其余64例标本ELISA结果仍处于灰区范围内，即64例结果S/CO值在0.8～（1.2）之间，占总标本数的54.7%。

　　3 讨论
　　
　　本实验结果处于临界范围的灰区问题一直是各实验室ELISA检测HBsAg过程中较为棘手的大难题之一。灰区标本的产生主要有如下原因：（1）被检者确实感染了乙型肝炎病毒，但其HBsAg在血液中含量较少而处于临界值中，如感染的“窗口期”、急性期后或恢复期、自限性感染末期的携带者等，都可造成检测结果处于灰区范围。本实验中24例复检结果在2.0以上的阳性标本可能即为此种原因导致。后带反应［5］也是不容忽视的影响因素之一，即当血清中含有高滴度HBsAg时，除部分HBsAg与包被抗体结合而吸附，大量剩余抗原被洗掉，只有极少量酶标抗体参与形成包被抗体抗原酶标抗体复合物而造成结果处于灰区。特别是在一步法实验时后带反应更明显。乙型肝炎病毒的变异而导致的HBsAg与相应抗体的反应性降低，机体不明原因而导致的HbsAg效价降低，及HBsAg亚型的存在等也可导致灰区的产生。（2）ELISA实验方法本身也受许多干扰因素的影响，如双抗体夹心法因受RF因子的干扰而产生的假阳性等。（3）酶标孔的孔间差异、试剂的批间差异等这些难以避免的误差也可导致灰区的产生。（4）由于现在嗜养宠物的人越来越多，产生嗜异性抗体的机会也越来越多，嗜异性抗体干扰实验也越来越多。（5）操作上的误差。HBsAg检测的批间精密度一般在30%以内，但有的可高达60%。精密度如此高的原因有许多：如洗涤的质量，可通过对非特异性吸附物质的排除与否而干扰实验结果；工作中难以避免的较小操作误差也会对实验结果产生影响，如反应终止后不同时间扫描而导致的OD值差异；孵育时间的长短及温度的不均衡同样会造成检测结果的差异［4］；（6）注射乙肝疫苗后，具有免疫原性的乙肝疫苗也会同HBsAg一样参与反应而产生灰区。
　　
　　很多时候都难以找到产生灰区的具体原因。总之，对检测HBsAg实验结果处于灰区范围的被检者进行动态观察，特别在一定时间间隔内重新取样检查，可以明显提高检测的准确度及HBsAg检验的应用价值，有的甚至还可以发现产生灰区的原因。

参考文献

　　1 谭玉华. 时间荧光免疫( TRFIA)法乙型肝炎病毒的检测及临床意义［J］. 中华医学研究杂志， 2005， 5 (3) : 228  230.

　　2 姚家奎，王晓玲，解松刚.应用实时荧光定量PCR技术检测慢性乙肝患者低浓度YMDD的研究［J］.实用临床医药杂志，2008，12(11):101+107.

　　3 汤春园，廖东铮. HBsAg低值弱阳性的临床探讨［J］. 广西医学杂志，2008，10（4）：476478.

　　4 邢自良. 如何保证HBsAg用ELISA 检测的可靠性［J］. 云南医药，2007，5（4）：420.

　　5 孙玉英. 酶联免疫一步法检测HBsA g 假阴性的观察［J］. 哈尔滨医药，1997， 17 (2):2829.