作者：郭建功 杜学彬 张春红
论文关键词 解郁胶囊 芍药苷 正交试验 提取工艺
论文摘要 目的 优选解郁胶囊的最佳提取工艺。方法 采用正交试验，以该药中白芍的主要成分芍药苷为指标成分，以加水量、煎煮时间、煎煮次数为因素进行正交试验。结果 优选出解郁胶囊的最佳提取工艺为加8倍量水，煎煮3次，每次1小时。结论 优选的提取工艺合理。
Absttract:Objective To optimize the extraction technology for Jieyu Capsule.Methods The orthogonal test was used to test the main factors of extraction process，including the amout of water，decocting time and decocting operation frequency，and the amount of paeoniflorin extraction was used as guide.Results The optimum condition was adding 8 times amount of water for decocting three times and each time for 1h.Conclusion The extraction process is reasonable.
Key words:Jieyu Casule;paeoniflorin;orthogonal test;extraction technology
解郁胶囊是解郁丸的改剂型品种，由白芍、柴胡、当归、郁金、茯苓、合欢皮等组成，具有疏肝解郁，养心安神的功效。治疗抑郁症疗效确切[1]，白芍为方中君药，具有明显的抗抑郁功效[2]。其主要成分芍药苷、苯甲酰芍药苷、氧化芍药苷均具有一定的水溶性，且水煎煮符合中药传统用药特点，因此可采用水煎煮法提取有效成分。本试验以主要成分芍药苷为提取的指标成分，采用正交试验优化了解郁胶囊的提取工艺，筛选出了最佳工艺。
1 仪器与试剂
Agilent 1100型高效液相色谱仪；BS124S型电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；芍药苷对照品（批号110736-200526，含量测定用，中国生物制品检定所）；甲醇、乙腈、磷酸二氢钠为色谱醇（所用水为我公司生产用纯化水的重蒸馏水）。
2 方法与结果
2.1 正交试验设计
选取加水量(因素A)、煎煮时间(因素B)、煎煮次数(因素C)作为考察因素，每个因素设计3个水平，采用L9(34)正交试验，以芍药苷为指标成分进行工艺优选。因素水平表见表1。
表1 因素水平表
2.2 芍药苷含量测定
2.2.1 色谱条件
色谱柱：CenturySIL C18BDS柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾（67：30：3）；检测波长：230nm；柱温：室温；流速：1.0mL/min；进样量10μL。
2.2.2 溶液制备
取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36h的芍药苷对照品适量，精密称定，置50mL量瓶中，加甲醇制成每1mL含0.4925mg的溶液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得对照品贮备溶液。精密吸取3mL对照品储备溶液，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液。精密吸取解郁胶囊提取液10.0mL置25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤纸过滤，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得供试品溶液。
2.2.3 方法学考察
标准曲线制备：精密吸取芍药苷对照品贮备溶液0.5，1，2，3，5，6，8mL分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，分别吸取10μL注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量(X)为横坐标、峰面积(Y)为纵坐标，得回归方程Y=1.98×105X +2.23×106，r=0.9999(n=7)。结果表明芍药苷进样量在0.2463～3.9400μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。
阴性干扰试验：取缺白芍的处方药材的水煎液，照供试品溶液制备方法制成缺少白芍的阴性对照品溶液。精密吸取芍药苷对照溶液、供试品溶液与阴性对照液溶液各10μL，注入液相色谱仪。芍药苷保留时间10.977分钟，供试品溶液相同保留时间有相同组分峰，阴性对照液相同保留时间无峰。结果表明芍药苷的色谱峰与样品中其他组分分离良好，阴性无干扰。
精密度试验：取对照品溶液10μL，按色谱条件，连续进样5次。结果峰面积RSD=1.36%(n=5)。表明精密度良好。
稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液，分别在0、2、4、6、8小时测定。结果峰面积的RSD=1.43%(n=5)。表明稳定性良好。
重现性试验：精密吸取同一供试品溶液5份，按上述色谱条件依法测定。结果RSD=0.67%(n=5)。表明方法重复性良好。
加样回收率试验：取6份已知含量的样品水煎液10mL(含量为0.18mg /mL)置25 mL量瓶中，共取6份，各精密加入芍药苷对照溶液(含量为1.9 mg /mL)1.0 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，依法测定含量，计算回收率。结果平均回收率为99.2%，RSD=1.97%(n=6)。
按处方取药材9份，每份174g，按照L9(34)正交试验表，加水煎煮，分别测定煎液中芍药苷含量，计算芍药苷提取量，进行方差分析，结果见表2、3。
通过极差R值可以直观的看出：因素C(煎煮次数)对解郁胶囊提取效果影响最大，其次为因素B(煎煮时间)、因素A(煎煮加水量)。方差分析结果表明，因素C(煎煮次数)对解郁胶囊提取有显著影响，因素A(煎煮加水量)，因素B(煎煮时间)煎煮提取时对指标组分芍药苷的影响不大。综合能效及人工等多方面因素，选取解郁胶囊水煎煮提取最佳工艺为A1B1C3，即加8倍量水，煎煮3次，每次1小时。
表2 L9(34)正交试验结果表
表3 方差分析
2.4 验证试验
分别取药材174g，称取3份，对优选的提取工艺进行3次试验验证。结果芍药苷的提取量分别为358 mg、356 mg、360 mg，表明工艺合理。
3 讨论
该方中还含有部分挥发性成分，煎煮提取前应进行提油操作，该工艺将另作阐述。
参考文献
1 马荣，姚海燕，库宝善，钱瑞琴，藏孝廉，郭建功. 解郁丸及其拆方对抑郁模型小鼠的抗抑郁作用及其差异比较. 中国临床康复，2005，9(16):115-117
2 邵继红，韩珍，杨艳，王婷，贺弋.白芍抗抑郁作用的实验研究.宁夏医学杂志，2008，30(6)：490-491