关于宫颈癌组织SLeX、CD44v6和ECad表达及其临床意义

【摘要】 目的 探讨细胞黏附分子唾液酸化路易斯X(SLeX)抗原、CD44v6和E钙黏附素(ECad)在浸润性宫颈鳞癌(ICC)中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学方法，检测60例ICC组织和20例慢性宫颈炎（CCV）组织中SLeX、CD44v6和ECad蛋白的表达水平， 并结合临床病理特征进行分析。结果 ICC组织中SLeX、CD44v6和ECad蛋白阳性表达率分别为60.0%（36/60）、66.7%（40/60）和45.0%(27/60)。ICC组织SLeX及CD44v6阳性表达率均显著高于CCV 组织(χ2=18.11、10.58，P&<0.05)，而ECad阳性表达率显著低于CCV组织(χ2=15.11，P&<0.05)。ICC组织SLeX和CD44v6高表达及ECad低表达与ICC的分化程度和淋巴转移有关（χ2=4.15～14.61，P&<0.05)，但与临床分期无关（χ2=1.64～3.21，P&>0.05）；SLeX和CD44v6表达与ECad表达有关(χ2=7.87、7.58，P&<0.05)。结论 ICC侵袭转移过程中，SLeX、CD44v6和ECad表达可能具有正、负协同效应，联合检测三者表达可作为判断ICC预后的参考指标。
【关键词】 宫颈肿瘤；肿瘤转移；唾液酸化路易斯X抗原；CD44v6; E钙黏附素;免疫组织化学
　　［ABSTRACT］ Objective To investigate the expression and clinical significance of adhesion molecules sialyl LewisX (SLeX) antigen， CD44v6 and Ecadherin (ECad) proteins in invasive carcinoma of cervix (ICC). Methods Immunohistochemical method was used to examine the expressions of SLeX，CD44v6 and ECad in 60 cases of ICC and 20 cases of chronic cervicitis (CCV)， and their association with clinical pathological features were analyzed. Results In ICC， the positive expression rates of SLeX，CD44v6 and ECad proteins were 60.0%(36/60)， 66.7%(40/60) and 45.0%(27/60)， respectively; which were significantly higher than those in CCV (χ2=18.11，10.58;P&<0.05). The positive ECad protein in ICC was lower than that in CCV (χ2=15.11，P&<0.05). The high expression of SLeX，CD44v6 and the low expression of ECad were positively correlated with the tumor grading and lymph node metastasis of ICC (χ2=4.15-14.61，P&<0.05)， but not significantly correlated with FIGO staging (χ2=1.64-3.21，P&>0.05). The expression of SLeX and CD44v6 were correlated with ECad (χ2=7.87，7.58;P&<0.05). Conclusion In the process of invasion and metastasis of ICC， the expressions of SleX， CD44v6 and ECad may have a positivenegative synergistic effect. Combined detection of the above three items can be used as a reference to predict the prognosis of ICC.
　　
　　［KEY WORDS］ uterine cervical neoplasms; neoplasm metastasis; sialyl LewisX antigen; CD44v6; Ecadherin; immunohistochemistry
　　
　　肿瘤的侵袭与转移是一个复杂的生物学过程，受多种基因的调控，其中细胞黏附分子（CAM）异常表达在肿瘤形成、侵袭和转移过程中起着关键作用。唾液酸化的路易斯X（SLeX）、CD44v6和E钙黏附素（ECad） 均为CAM成员，其表达与许多肿瘤的侵袭和转移密切相关[17]。本文应用免疫组化方法检测宫颈鳞癌（ICC）和慢性宫颈炎（CCV）组织中SLeX、CD44v6和ECad蛋白表达情况，探讨这3种CAM表达与ICC的发生发展、临床分期、分化程度及转移的关系。现将结果报告如下。
　　1 材料和方法
　　1.1 材料
　　1.1.1 标本及其来源
　　取我院2004年1月—2008年12月间手术切除、并经病理诊断为ICC标本60例，病人年龄23～78岁，平均（57.67±8.32）岁。按细胞分化程度分为高分化癌25例，中、低分化癌35例。无淋巴结转移者26例，有淋巴结转移者34例。临床病理分期采用国际妇产科联盟（FIGO，2000）宫颈癌的分期法：Ⅰa期9例，Ⅰb期20例，Ⅱa期31例。取同期CCV 组织20例作为对照。所有标本均经40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，片厚4～5 μm。
　　1.1.2 试剂 鼠抗人SLeX（CD15s）、CD44v6 和ECad单克隆抗体和LSAB试剂盒均为丹麦Dako公司产品（均为即用型）。
　　1.2 方法
　　1.2.1 SLeX、CD44v6 和ECad蛋白检测
　　采用免疫组织化学LSAB法，将切片常规脱蜡水化后，放入枸橼酸缓冲液(10 mmol/L，pH 6.0)内，用微波仪170 W辐射5 min，冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法，不同之处为3步抗原孵肓和正常血清封闭使用微波仪130 W分别辐射5 min，保温2 min即可。实验用已知SLeX、CD44v6和ECad阳性食管癌组织作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。h3O2DAB显色。
　　1.2.2 结果判断
　　SLeX、CD44v6 和ECad阳性表达者细胞质和细胞膜显示棕黄色染色颗粒，凡无棕黄色染色颗粒者为阴性。
　　1.2.3 统计学处理
　　采用χ2检验，以P&<0.05为差异有显著性。
　　2 结果
　　2.1 SLeX、CD44v6 和ECad在宫颈良恶性病变组织中的表达
　　
　　免疫组织化学染色显示，SLeX和CD44v6阳性产物定位于细胞膜和细胞质，背景清晰；ECad阳性产物位于细胞质，背景清晰。20例CCV中，SLeX均为阴性表达；5例(25.0%)CD44v6阳性表达，阳性染色主要表达于基底层细胞膜上，表层细胞无表达；20例的ECad均呈不同程度阳性表达。ICC组织中，SLeX、CD44v6和ECad的阳性表达率分别为60.0%（36/60）、66.7%（40/60）和45.0%(27/60)。ICC组织中SLeX和CD44v6阳性表达率显著高于CCV（χ2=18.11、10.58，P&<0.05），ECad阳性表达率显著低于CCV（χ2=15.11，P&<0.05）。
　　2.2 SLeX、CD44v6和ECad表达与ICC临床病理特征的关系
　　
　　ICC组织SLeX和CD44v6高表达及ECad低表达与ICC的分化程度和淋巴结转移有关（χ2=4.15～14.61，P&<0.05)，但与临床分期无关（χ2=1.64～ 3.21，P&>0.05）。见表1。表1 SLeX、CD44v6和ECad与ICC临床病理特征的关系临床病理特征nSLeX阳性（略）
　　2.3 ICC组织SLeX、CD44v6和ECad表达之间的关系
　　
　　在SLeX阳性表达的36例ICC中，CD44v6和ECad的阳性表达分别为29例(80.6%)和11例(37.6%)；而在 SLeX阴性表达的24例ICC中，CD44v6和ECad阳性表达分别为11例(45.8%)和16例(66.7%)，差异均有显著意义(χ2=7.81、7.87，P&<0.05)。在CD44v6阳性表达的40例ICC中， ECad阳性表达13例(32.5%)；在CD44v6阴性表达的20例ICC病人中，ECad阳性表达14例(70.0%)，差异有显著性(χ2=7.58，P&<0.05)。

　3 讨论
　　
　　SLeX抗原是表达在胚胎和肿瘤组织细胞膜表面的糖脂及糖蛋白聚糖上的一组唾液酸化糖缀合物，是糖蛋白的末梢寡糖，为CAM选择素P和 E（CD62P和CD62E）所识别的配基[1]，属CAM成员。SLeX可诱导血管内皮细胞黏附，介导肿瘤细胞与基质成分或内皮细胞相关受体结合，从而在肿瘤的侵袭和转移过程中起着关键性作用[2]。研究证实，SLeX表达增强常出现在细胞的致癌和肿瘤的进展过程中，SLeX阳性表达的肿瘤侵袭性强，转移及复发率高，病人存活率低[23]。CD44v6是最早被发现的含有变异型外显子v6编码序列的CD44分子，也是近年来研究较多的黏附分子，其在人体组织中分布极为广泛，被认为是肿瘤转移促进基因，可赋予肿瘤细胞以转移能力。CD44v6的过量表达与多种人体恶性肿瘤的发生发展、侵袭转移和不良预后密切相关，是判断肿瘤生物学行为及预后因素的重要标志[36]。ECad是钙黏附蛋白分子家族中跨膜蛋白亚型的一种，主要存在于人和动物的上皮细胞，对维护上皮细胞的形态和结构完整性起着重要作用。ECad主要介导同型细胞的黏附功能，当其表达下降或缺失时，同种细胞无法相互粘连，进一步使细胞易于分散而向外周浸润，可导致肿瘤细胞侵袭性生长与转移，这已在许多恶性肿瘤的研究中得到证实[3，69]。本研究结果显示，在CCV组织中SLeX不表达，CD44v6仅表达于基底细胞和（或）内基底细胞，阳性表达率为25.0%；ECad均呈不同程度阳性表达。在ICC组织中SLeX和CD44v6阳性表达率均显著高于CCV，ECad阳性表达率则显著低于CCV。随着ICC分化程度减低和淋巴结转移，SLeX和CD44v6阳性表达率显著增高，而ECad阳性表达率则显著降低。表明SLeX和CD44v6表达的上调和ECad表达的下调与ICC的发生密切相关，并在ICC的细胞分化和转移过程中起重要的作用。检测三者基因蛋白表达，不仅是研究ICC发生发展的较可靠的重要标志物，而且对宫颈良恶性病变辅助诊断、判断肿瘤恶性程度、生物学行为及病人预后也是一个较可靠的、具有较大价值的参考指标。
　　
　　本研究结果还显示，ICC组织中SLeX、CD44v6和ECad表达之间有关。提示SLeX、CD44v6和ECad表达在ICC的发生、细胞增殖、分化和转移的病理过程中具有相互诱导的调节或负调节的协同作用。因此，深入探讨它们之间的作用及机制，将对阐明或阻断肿瘤侵袭转移具有重要意义。

参考文献

　　[1]YAMAGUCHI A， GOI A， SEKI K， et al. Clinical significance of combined immunohistochemical detection of CD44v and sialyl LeX expression for coloectal cancer patients undergoing curative resection[J]. Onclolgy， 1998，55(5):400403.

　　[2]DENBOER M L， PIETER S R， KAZEMIER K M， et al. Different expression of glutathione Stransferase alpha，mu and pi in childhood acute lymphoblastic and myeloid leukaemia[J]. Br J Haematol， 1999，104(2):321327.

　　[3]谷化平，尚培中，倪灿荣. Sialyl LewisX，CD44v6和Ecadherin表达与肝细胞癌转移和预后的关系[J]. 中华普通外科杂志， 2003，18(1):109111.

　　[4]谷化平，尚培中. CD44v6和PTEN蛋白表达与大肠癌浸润转移的关系[J]. 青岛大学医学院学报， 2008，44(1):35.

　　[5]柳盛，吕洪，丛书英. 原发性肝细胞癌组织VEGFC和CD44v6表达及意义[J]. 齐鲁医学杂志， 2009，24(1):13.

　　[6]JOO M， LEE H K， KANG Y K. Expression of Ecadherin， betacatenin， CD44s and CD44v6 in gastric adenocarcinoma:relationship with lymph node metastasis[J]. Anticancer Res， 2003，2(2B):15811589.

　　[7]KOKSAL T， OZCON F， KILICASLAN I， et al. Expression of Ecadherin in prostate cancer in forrnalinfixed，paraffinembedded tissues: correlation with pocthological features[J]. Pathology， 2002，34(3):233238.

　　[8]纪清莲，孙玲玲，付伟伟，等. 胰腺癌组织Cx43和Ecad表达及意义[J]. 青岛大学医学院学报， 2009，43(1):3840.

　　[9]王安，王晓，王军，等. 膀胱尿路上皮癌组织中Ezrin和Ecadherin的表达[J]. 青岛大学医学院学报， 2009，45(1):1315.