正交实验优选冠通贴剂乙醇回流工艺

　　　　 作者：吴金伟，何宇新，马育彪，米之金

【摘要】 目的优选出冠通贴剂的乙醇回流条件。方法采用正交实验法，以淫羊藿苷含量和浸膏得率为评价指标，对淫羊藿等3味药材乙醇回流的乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数进行优选。结果最终确定最佳工艺为加70%乙醇10倍，提取两次，1.5 h/次。结论用此工艺进行验证试验，表明此工艺合理稳定，可以为工业生产提供理论基础。

【关键词】 淫羊藿苷； 浸膏得率； 正交实验； 高效液相色谱

冠通贴剂由淫羊藿、丹参、贯叶连翘3味中药制成的透皮贴剂，具有增加冠脉流量，扩张外周血管的功效。方中君药为淫羊藿，淫羊藿主要含淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷（ICA）、生物碱、维生素E等成分，其中淫羊藿苷能明显抑制心肌收缩力，降低心肌耗氧量，降低外周阻力，降低心脏负荷，这对于冠心病患者来说是十分有利的［ 1］。所以本文用正交实验法，以淫羊藿苷含量和浸膏得率为评价指标，对乙醇回流提取的乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数进行优选。

　　1 材料与仪器

　　1.1 材料

　　淫羊藿、丹参、贯叶连翘购自四川省成都市西南药都，经鉴定，药材符合《中国药典》2005版要求。淫羊藿苷对照品购自中国药品生物制品检定所（110737-200414）。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

　　1.2 仪器

　　岛津LC-20型高效液相色谱仪，主要组成部分为LC-20AB型泵、SIL-20AC自动进样器、SPD-M20A紫外检测器。色谱柱：UltimateTM XB-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm），成都思为科学仪器有限公司产品。

　　2 方法

　　2.1 测定条件［2］

　　流动相为乙腈-水（30 ∶70）；检测波长270 nm；流速1 ml/min;进样量10 μl；柱温35℃。

　　2.2 正交实验以淫羊藿苷含量和浸膏得率为指标，考察乙醇回流影响因素：乙醇浓度、提取时间、乙醇用量、提取次数。采用L9（34）正交表进行实验。因素水平见表1。表1 因素水平（略）

　　2.3 淫羊藿苷含量测定

　　2.3.1 标准品的配制

　　精密称取60℃干燥至恒重的淫羊藿苷标准品5.2 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇定容至刻度，得浓度为0.104 mg/ml的标准品溶液。

　　2.3.2 供试品溶液的制备

　　称取淫羊藿、丹参、贯叶连翘各适量，按照表1～2进行正交实验。过滤，分别定容，用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，即得供试品溶液。表2 正交实验（略）

　　按下列公式计算总评分：浸膏得率加权评分（y1）=（浸膏得率/最大浸膏得率）×20
　　
　　淫羊藿苷含量加权评分（y2）=（淫羊藿苷含量/最大淫羊藿苷含量）×80
　　
　　总评分=y1 + y2
　　
　　结果见表2 正交实验直观分析表，方差分析结果见表3。表3 方差分析结果（略）

　　2.3.3 阴性样品的制备

　　取丹参药材、贯叶连翘适量，同5号试验制备。

　　2.3.4 测定波长的确定

　　取标准品溶液，进样10 μl，在180～820 nm波长范围内扫描，可见标准液在270 nm处有最大吸收峰，故确定检测波长为270 nm。

　　2.3.5 线性关系考察

　　分别用标准溶液进样2，4，8，16，20 μl进行测定，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线。淫羊藿苷在0.208～2.08 μg之间线性关系很好。回归方程为：Y= 237 522X- 262.77，r=0.999 9。

　　2.3.6 精密度考察

　　同一标准品连续进样6次，HPLC法测定。结果RSD为1.41%。

　　2.3.7 淫羊藿苷含量测定

　　分别精密吸取标准品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液10 μl，分别注入液相色谱，按“2.1”项下条件测定。结果见表2。高效液相色谱图见图1。

　　2.3.8 稳定性实验

　　同一样品溶液各1 h测1次，共测12 h。结果表明样品液中淫羊藿苷在12 h内稳定，其峰面积RSD为2.66%。2.4 浸膏得率的测定 分别吸取定容后的样品液20 ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速称量，计算浸膏得率。结果见表2。

　　2.5 验证实验

　　为验证最佳工艺的准确性，保证醇提工艺的合理和稳定，按最终确定的最佳工艺，进行验证试验（n=3）。

　　3 讨论
　　
　　根据表3可知各因素对浸膏得率没有显著性影响（P<0.05），提取次数对浸膏得率影响最大，乙醇浓度对淫羊藿苷含量有显著性影响（P<0.05），所以在确定最佳工艺时应主要考虑乙醇浓度和提取次数。各因素对提取过程的影响依次是：A>B>D>C，方差分析（见表3）结果表明，乙醇浓度对淫羊藿、丹参、贯叶连翘乙醇回流有显著性影响，从表2可以看出最佳工艺为A3B3C2D3，但是考虑实际应用中节约时间和适当降低浸膏得率，且提取次数对淫羊藿苷含量影响小，最终决定以加70%乙醇10倍，提取两次，1.5 h/次，进行提取。按照此工艺进行验证试验，结果淫羊藿苷含量均在4.20 mg/g以上，浸膏得率平均值为26.36%，说明此工艺合理，稳定，可以作为工业生产的理论基础。

参考文献