银杏内酯B衍生物对血栓形成的抑制作用

　　　　　　 作者：崔姣，潘苏华，刘成鼎，许惠琴

【摘要】 　　【目的】 观察银杏内酯B衍生物(XQ)对实验性血栓形成的影响。【方法】选用SD雄性大鼠随机分为模型对照组，曲克芦丁组(剂量为48 mg·kg-1·d-1)，银杏内酯B(GB)组(剂量为78 mg·kg-1·d-1)，XQ低、中、高剂量组(剂量分别为39、78、156 mg·kg-1·d-1)。分别采用颈动—静脉旁路法复制血栓模型及电刺激法复制混合血栓模型，观察XQ对血栓形成的影响。选用ICR雄性小鼠随机分为模型对照组，曲克芦丁组(剂量为96 mg·kg-1·d-1)，GB组(剂量为156 mg·kg-1·d-1)，XQ低、中、高剂量组(剂量分别为78、156、312 mg·kg-1·d-1)。采用5腺苷二磷酸二钠盐(ADP)致小鼠急性肺血栓模型，观察XQ对血栓形成的影响。【结果】XQ中、高剂量组均能显著减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量(与模型对照组比较，P＜005或P＜001)，显著延长大鼠混合血栓形成时间(与模型对照组比较，P＜005)。XQ高剂量组对小鼠急性肺血栓形成有抑制作用，并可显著缩短小鼠的喘促持续时间(与模型对照组比较，P＜005)。【结论】 XQ具有一定的抗血栓形成作用。

【关键词】 银杏内酯B衍生物/药理学 血栓形成/中药疗法 疾病模型，动物 大鼠 小鼠

　　Abstract: ObjectiveTo observe the effect of ginkolide B derivative (XQ) on animal thrombosis. MethodsSD male rats were randomized into the model group， troxerutin (48 mg·kg-1·d-1) group， ginkolide B(78 mg·kg-1·d-1) group， and low， middle and highdose XQ (in the dose of 39， 78 and 156 mg·kg-1·d-1 respectively) groups. The antithrombotic effect of XQ was observed on rats mixed thrombosis model induced by arteriovenous shunt method and electrical stimulation. Meanwhile， ICR male mice were randomized into the model group， troxerutin (96 mg·kg-1·d-1) group， ginkolide B(156 mg·kg-1·d-1) group， and low， middleand highdose XQ (in the dose of 78， 156 and 312 mg·kg-1·d-1 respectively) groups. The antithrombotic effect of XQ was also observed on mice acute pulmonary embolism model induced by adenosine diphosphate (ADP).ResultsXQ at the dose of 78 and 156 mg·kg-1·d-1 decreased the dry and wet weight of the thrombosis， and obviously prolonged the formation time of rats carotid artery thrombosis as compared to the model group (P&<005 or P&<001). XQ in the dose of 312 mg·kg-1·d-1 shortened dyspnea duration in mice with acute pulmonary embolism (P&<005 compared to the model group). ConclusionXQ has certain antithrombotic effect．

　　Key words: GINKOLIDE B DERIVATIVE/pharmacology;THROMBOGENESIS/TCD therapy;DISEASE MODELS，ANIMAL;RATS;MICE

　　银杏内酯B是银杏科银杏属植物银杏(Ginkgo biloba L.)的提取物，其在心脑血管方面的药用价值已经被全世界所公认［1］。银杏内酯B衍生物(XQ)是在母体的基础上增加了水溶性的基团，前期实验研究［2］表明XQ体内外给药能抑制血小板活化因子(PAF)、5腺苷二磷酸二钠盐(ADP)、酸溶性胶原(COL)、花生四烯酸(AA)等诱导血小板的聚集。为进一步研究XQ的药理作用机制，本实验观察了其对体内外血栓形成的影响，现报道如下。

　　1　材料与方法

　　1.1　受试药物及药品

　　银杏内酯B衍生物(XQ)由南京柯菲平医药科技有限公司提供，批号：060301；银杏内酯B(GB)，为白色结晶体，分子量为4244 g/mol，由合肥标品生物技术有限公司提供，批号：051001；曲克芦丁注射液由天津药业焦作有限公司提供，批号：05072721。
　
　　1.2　试剂
　
　　ADP为Sigma公司产品，批号：YY1124B056W，氯化钠注射液为南京小营制药有限公司产品，批号：2005090101，戊巴比妥钠由中国医药(集团)上海化学试剂公司(进口分装)提供，批号：F20020405，肝素钠注射液为江苏万邦生化医药股份有限公司产品，批号： 0601101，葡甲胺为成都科东化工有限公司产品，批号：20060320。

　　1.3　实验动物

　　雄性清洁级SD大鼠，体质量250～280 g，由中国人民解放军医学动物实验中心(南京军区南京总医院)提供，生产许可证号：SCXK(苏)20030004。SPF级ICR小鼠，体质量20～22 g，乾元浩生物股份有限公司南京生物药厂提供，生产许可证号：SCXK(苏)20020030。

　　1.4　实验仪器
　
　　FA2104上皿电子天平为上海精科公司产品，BT873型实验性体内血栓形成测定仪由包头医学院心血管研究室提供，DHG9123A型电热恒温鼓风干燥箱由上海精宏实验设备有限公司提供。

　　1.5　方法

　　1.5.1　XQ 对颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响 ［3-4］取雄性SD大鼠48只，按体质量随机分为6组，即模型对照组，曲克芦丁组(剂量为48 mg·kg-1·d-1)，GB组(剂量为78 mg·kg-1·d-1)，XQ低、中、高剂量组(剂量分别为39、78、156 mg·kg-1·d-1)。各组均尾静脉给药，容积为5 mL/kg，连续5 d，模型对照组给予等容积的生理盐水。给药第5天，大鼠以10 mg/L戊巴比妥钠溶液(30 mg/kg)麻醉，分离右颈总动脉及左颈外静脉。在3段聚乙烯管中放入1根长约6 cm的4号手术丝线。以50 U/mL肝素生理盐水溶液充满聚乙烯管腔，当管的一端插入左颈外静脉后，从聚乙烯管注入肝素(50 U/kg)，夹住管壁，将管的另一端插入右颈总动脉，然后尾静脉给药。给药5 min后开放血流并计时，15 min后中断血流。迅速取出丝线称质量，用总质量减去丝线质量即为血栓湿质量。将丝线70 ℃烘干，取出称质量，总质量减去丝线质量即为血栓干质量。按下列公式计算抑制率：p抑制，湿质量(%)=(m湿，对照组 – m湿，给药组)/m湿，给药组×100%；p抑制，干质量(%)=(m干，对照组 – m干，给药组)/m干，给药组×100%。

　　1.5.2　XQ对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后混合血栓形成的影响［4-5］分组及给药方法同151项下。给药第5天，大鼠以10 mg/L戊巴比妥钠溶液(30 mg/kg)麻醉，分离右侧颈总动脉(长约15 mm)，用塑料薄膜与附近组织隔开，在动脉近心端放刺激电极，远心端下放连接仪器的温度测头，然后尾静脉给药。给药5 min后，打开仪器开关，以16 mA直流电刺激动脉7 min，使刺激部位的血管内皮受损，激活血小板和凝血系统，管腔混合血栓逐渐形成，血流逐渐阻断，当血流完全阻断时，远端温度突降，仪器报警，显示堵塞时间(t堵塞)，即血栓形成时间。

　　1.5.3　XQ对ADP致小鼠肺血栓形成的影响［6-7］取健康雄性ICR小鼠60只，随机分为6组，即模型对照组，曲克芦丁组(剂量为96 mg·kg-1·d-1)，GB组(剂量为156 mg·kg-1·d-1)，XQ低、中、高剂量组(剂量分别为78、156、312 mg·kg-1·d-1)。各组均尾静脉给药，容积为10 mL/kg，连续5 d，模型对照组给予等容积的生理盐水。末次给药后15 min，按200 mg/kg尾静脉注射ADP溶液，形成急性肺血栓(小鼠呼吸喘促、不能自主活动)，记录注射ADP后至小鼠恢复自主活动的时间。

　　1.6　统计学方法采用Excel软件处理数据。

　　2　结果

　　2.1　各组对大鼠颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响

　　表1 结果显示：XQ中、高剂量组均能显著减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量，与模型对照组比较差异有非常显著性意义(P&<005或P&<001)；曲克芦丁组及GB组也能减轻大鼠动脉血栓的湿、干质量，与模型对照组比较差异有显著性意义(P&<005)。表1各组对大鼠颈动—静脉旁路丝线上血栓形成的影响（略）

　　2.2　各组对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后血栓形成的影响

　　表2 结果显示：XQ 中、高剂量组，曲克芦丁组和GB组均能显著延长血栓形成时间，与模型对照组比较差异有显著性意义(P&<005)。表2各组对电流损伤大鼠颈总动脉内膜后
血栓形成的影响（略）

　　2.3　各组对ADP致小鼠急性肺血栓形成的影响

　　表3 结果显示：XQ 高剂量组及曲克芦丁组对ADP诱发的小鼠急性肺血栓形成有抑制作用，均可缩短小鼠的喘促持续时间，与模型对照组比较差异有显著性意义(P&<005)。表3各组对ADP致小鼠急性肺血栓形成的影响（略）

　　3　讨论

　　大多数心脑血管疾病发生的前提是动脉粥样硬化血栓的形成，血小板的活化在血栓形成过程中发挥重要的作用［8］。血栓形成主要取决于血管内膜受损、血液成分改变及血流异常3个基本要素。血小板活化、黏附、聚集易造成微循环淤滞，还可损伤血管内皮，释放生长因子，促进平滑肌增殖，从而导致动脉粥样硬化［9］。血栓按照发生的部位分为静脉血栓和动脉血栓。静脉血栓主要由于血流缓慢或淤滞，凝血因子聚集而导致血液凝固所引起，富含纤维蛋白和红细胞(红血栓)。颈动—静脉旁路丝线上形成的血栓主要是动脉血栓，主要由于血小板相互聚集所引起，血小板的黏附聚集功能对形成的血栓质量有直接影响，稳定的纤维蛋白和血小板组成白血栓。颈动脉电流损伤法形成的血栓主要是混合血栓，红白血栓两者兼而有之［10-11］。

　　本研究结果显示：XQ能显著抑制实验性动—静脉旁路血栓形成，显著降低血栓干、湿质量，延长电击后混合血栓引起的血管堵塞时间，缩短ADP诱发急性肺血栓后小鼠恢复自主活动的时间，表明其抗血栓作用可能与抑制血小板聚集有关。复合血栓诱导剂ADP能使纤维蛋白原与相应位点结合，并使血小板内贮存的钙释放，进而促进内源性AA释放而致血小板聚集［12］。XQ能使血小板的聚集性减弱，降低血浆黏度，增强纤溶系统，使血小板处于解聚集状态，从而抑制血栓的形成。

　　由前期实验研究可知，XQ抑制血小板聚集的作用是通过拮抗PAF受体而实现的，而且其对ADP、AA、COL诱导的血小板聚集的半数抑制浓度(IC50)高于银杏内酯B［2］。本实验结果也显示了XQ在一定程度上抗血栓形成作用较GB强。XQ作为银杏内酯B的衍生物，增加了水溶性，并仍然保持相似的生物活性，作为防治心脑血管疾病的新药具有一定的开发前景。

参考文献

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